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ハンチンチン病の病態モデルマウス作成とその解析

亨廷顿病小鼠模型的建立及分析

基本信息

批准号：
08256241
负责人：
石黒啓司
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はハンチントン遺伝子のCAGリピート増幅とハンチンチン病(HD)発症の関係に注目し、CAGリピートが増幅するとなぜ選択的神経細胞死がおこるか解明するためにモデル動物を作製することを最初の目的としている。ハンチンチン病患者より得られた82リピートのCAGを持つハンチントン遺伝子のエクソン1をマウス遺伝子のエクソン1と入れ替えたES細胞導入用構造遺伝子を作成した。マウスの遺伝子はエクソン1より上流約6Kbとその下流約2.5Kbを含んでおり、エクソン1の下流にloxP塩基配列で挟まれたneo発現遺伝子をハンチンチン遺伝子と反対の向きに導入した。ネガティブセレクションマーカーとしてジフテリアトキシンA発現ベクター(pMC1/DTA)を両端に組み入れ、全構造遺伝子をλFixII phage DNAのNot I siteに結合した。構造遺伝子作成の過程でCAGリピートが27のplasmidDNAおよびCAGリピートが113に伸長したphageDNAをも得ることがきた。エレクトロポーレーションによってCAGリピート82を持つ遺伝子をES細胞に導入した。G418選択培地中で育成する312個のES細胞のゲノムDNAを検討した結果、18個の正しいホモロガスリコンビネイションを起こしたクローンを得た。その結果50%にあたる9クローンにCAGリピート82を持つES細胞を得た。その他6クローンは正常域であるCAGリピート約25に短くなっていた。さらに、2クローンはCAGリピート約45から約70程度に減少した。残りの1クローンは逆に伸長しておりそのCAGリピート数は約120であった。これらのクローンを用いてキメラマウスを作製したところ雄21匹、雌12匹の合計33匹を得た。現在、これらのマウスを交配によりヘテロマウスを作製している。

This study focuses on the relationship between CAG and HD development, CAG and HD development, and the relationship between CAG and HD development, CAG and HD development, and the relationship between CAG and HD development and HD development. The gene of CAG was prepared by the gene of ES cell introduction. The upflow is about 6Kb and the downflow is about 2.5Kb. The downflow is about 2.5Kb and the downflow is about 2.5Kb. The downflow is about 2.5Kb and the downflow is about 2.5Kb. The downflow is about 2.5Kb. The DNA of the fixed II phase DNA was combined with the DNA of the fixed II phase DNA at the Not I site. The process of making CAG fragments is called plasmidDNA fragmentation, and CAG fragments are called phaseDNA fragmentation. CAG-82 is the first cell to be introduced into ES cells. 312 ES cells were cultured in G418 and 18 ES cells were successfully cultured. 50% of the results were obtained from CAG 82 cells. He is a 6-year-old boy. The number of CAGs decreased from about 45 to about 70. The number of CAGs is about 120. 21 males and 12 females in total Now, you're going to have to do something.