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ハンチンチン病の病態モデルマウス作成とその解析

亨廷顿病小鼠模型的建立及分析

基本信息

批准号：
08256241
负责人：
石黒啓司
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はハンチントン遺伝子のCAGリピート増幅とハンチンチン病(HD)発症の関係に注目し、CAGリピートが増幅するとなぜ選択的神経細胞死がおこるか解明するためにモデル動物を作製することを最初の目的としている。ハンチンチン病患者より得られた82リピートのCAGを持つハンチントン遺伝子のエクソン1をマウス遺伝子のエクソン1と入れ替えたES細胞導入用構造遺伝子を作成した。マウスの遺伝子はエクソン1より上流約6Kbとその下流約2.5Kbを含んでおり、エクソン1の下流にloxP塩基配列で挟まれたneo発現遺伝子をハンチンチン遺伝子と反対の向きに導入した。ネガティブセレクションマーカーとしてジフテリアトキシンA発現ベクター(pMC1/DTA)を両端に組み入れ、全構造遺伝子をλFixII phage DNAのNot I siteに結合した。構造遺伝子作成の過程でCAGリピートが27のplasmidDNAおよびCAGリピートが113に伸長したphageDNAをも得ることがきた。エレクトロポーレーションによってCAGリピート82を持つ遺伝子をES細胞に導入した。G418選択培地中で育成する312個のES細胞のゲノムDNAを検討した結果、18個の正しいホモロガスリコンビネイションを起こしたクローンを得た。その結果50%にあたる9クローンにCAGリピート82を持つES細胞を得た。その他6クローンは正常域であるCAGリピート約25に短くなっていた。さらに、2クローンはCAGリピート約45から約70程度に減少した。残りの1クローンは逆に伸長しておりそのCAGリピート数は約120であった。これらのクローンを用いてキメラマウスを作製したところ雄21匹、雌12匹の合計33匹を得た。現在、これらのマウスを交配によりヘテロマウスを作製している。

The purpose of this study is to understand the effects of cell death in the patients with CAG disease (HD) and CAG disease (HD). The patient was told that he was sick and that the CAG had to use the computer to make the ES cell. The upstream and downstream of the 6Kb are different from each other. The downstream of the 2.5Kb contains the downstream. The downstream of the loxP is based on the configuration of the sub-column. The neo shows that the sub-stream is not in the same direction. Do you want to know how to make sure that you are fully aware that the pMC1/DTA system is available and that the whole system is integrated into the system λ FixII phage DNA Not I site? The whole process of CAG manufacturing is to improve the performance of the phageDNA. 27 percent of the plasmidDNA will increase the cost of the phageDNA. I don't know what to do. I don't know. I don't know, I don G418 selected a total of 312 ES cells in the middle of the cultivation area to get the results of the DNA test results, and 18 were selected to be successful. The results show that 50% of the data have been recorded in the CAG system. The ES cell has been successfully obtained in 82%. He is 6 years old. The normal area is CAG. He is short. If you don't know what to do, you will have to pay more than 45 percent to 70 percent less than 50 percent. 2 times later, the CAG will be reduced. The number of CAG per day is about 120 yuan. There were 21 males and 12 females with a total of 33 horses in total. Now, I don't know how to mate. I don't know what to do.