ハンチンチン病の病態モデルマウス作成とその解析

亨廷顿病小鼠模型的建立及分析

• 批准号: 08256241
• 负责人: 石黒 啓司
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08256241/
• 关键词: ハンチントン病; huntingtin遺伝子; 病態モデルマウス; トリプレットリピート病

本研究はハンチントン遺伝子のCAGリピート増幅とハンチンチン病(HD)発症の関係に注目し、CAGリピートが増幅するとなぜ選択的神経細胞死がおこるか解明するためにモデル動物を作製することを最初の目的としている。ハンチンチン病患者より得られた82リピートのCAGを持つハンチントン遺伝子のエクソン1をマウス遺伝子のエクソン1と入れ替えたES細胞導入用構造遺伝子を作成した。マウスの遺伝子はエクソン1より上流約6Kbとその下流約2.5Kbを含んでおり、エクソン1の下流にloxP塩基配列で挟まれたneo発現遺伝子をハンチンチン遺伝子と反対の向きに導入した。ネガティブセレクションマーカーとしてジフテリアトキシンA発現ベクター(pMC1/DTA)を両端に組み入れ、全構造遺伝子をλFixII phage DNAのNot I siteに結合した。構造遺伝子作成の過程でCAGリピートが27のplasmidDNAおよびCAGリピートが113に伸長したphageDNAをも得ることがきた。エレクトロポーレーションによってCAGリピート82を持つ遺伝子をES細胞に導入した。G418選択培地中で育成する312個のES細胞のゲノムDNAを検討した結果、18個の正しいホモロガスリコンビネイションを起こしたクローンを得た。その結果50%にあたる9クローンにCAGリピート82を持つES細胞を得た。その他6クローンは正常域であるCAGリピート約25に短くなっていた。さらに、2クローンはCAGリピート約45から約70程度に減少した。残りの1クローンは逆に伸長しておりそのCAGリピート数は約120であった。これらのクローンを用いてキメラマウスを作製したところ雄21匹、雌12匹の合計33匹を得た。現在、これらのマウスを交配によりヘテロマウスを作製している。

This study は ハ ン チ ン ト ン posthumous son 伝 の the CAG リ ピ ー ト rights of と ハ ン チ ン チ ン disease (HD) 発 disease の masato に attention し, the CAG リ ピ ー ト が rights of す る と な ぜ sentaku god 経 cell death が お こ る か interpret す る た め に モ デ ル animal を cropping す る こ と original purpose の を と し て い る. ハ ン チ ン チ ン patients よ り have ら れ た 82 リ ピ ー ト の the CAG を hold つ ハ ン チ ン ト ン posthumous son 伝 の エ ク ソ ン 1 を マ ウ ス posthumous son 伝 の エ ク ソ ン 1 と into れ for え た ES cells into with the son structure but 伝 を し た. マ ウ ス の posthumous son 伝 は エ ク ソ ン 1 よ り upper 6 Kb と そ の obscene contains about 2.5 Kb を ん で お り, エ ク ソ ン 1 の obscene に loxP salt base with column で carry ま れ た neo 発 now heritage 伝 son を ハ ン チ ン チ ン posthumous son 伝 と anti polices の to き に import し た. ネ ガ テ ィ ブ セ レ ク シ ョ ン マ ー カ ー と し て ジ フ テ リ ア ト キ シ ン A 発 now ベ ク タ ー (pMC1 / DTA) を struck み に group with the れ, whole structure but 伝 を lambda FixII phage DNA の Not I site に combining し た. Tectonic heritage 伝 son made で の process the CAG リ ピ ー ト が 27 の plasmidDNA お よ び the CAG リ ピ ー ト が 113 に elongation し た phageDNA を も must る こ と が き た. エ レ ク ト ロ ポ ー レ ー シ ョ ン に よ っ て the CAG リ ピ ー ト 82 を hold つ heritage 伝 を ES cells に import し た. G418 sentaku で す bred in petty る 312 の ES cells の ゲ ノ ム DNA を beg し 検 た results, 18 の is し い ホ モ ロ ガ ス リ コ ン ビ ネ イ シ ョ ン を up こ し た ク ロ ー ン を た. そ の results 50% に あ た る 9 ク ロ ー ン に the CAG リ ピ ー ト 82 を hold た を つ ES cells. Youdaoplaceholder0 そ そ he 6 <s:1> ロ ロ ロ <e:1> た である normal domain であるCAGリピ ト ト approximately 25に short くなって た た た た. Youdaoplaceholder0, 2 <s:1> ロ, ロ, <s:1>, ロ, CAGリピ, ト approximately 45 ら, ら approximately 70 degrees に reduce た. The inverse に elongation of the residual ロ 1 ロ <s:1> <e:1> <e:1> に is approximately 120であった ト ト ト ト ト ト ト of ト CAG, which is approximately 120であった. こ れ ら の ク ロ ー ン を with い て キ メ ラ マ ウ ス を cropping し た と こ ろ male 21 horses, female 12 ones の total 33 of を た. Now, <s:1> れら れら れら ウスを ウスを ウスを mate によ ヘテロ ウスを ウスを make て て る る.

项目成果

野村隆英: "ニューロトランスミッター・トゥディ" 神経精神薬理, 283 (1997)

Takahide Nomura：“今天的神经递质”神经精神药理学，283（1997）