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細胞内発現抗体を用いたCAGリピート病の発症解明と遺伝子治療への応用

使用细胞内抗体阐明 CAG 重复疾病的发病及其在基因治疗中的应用

基本信息

批准号：
13210131
负责人：
石黒啓司
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

CAGリピート病は神経変性疾患に特有の遺伝子変異であり、その翻訳された産物には伸長ポリグルタミン鎖が共通の細胞内異常蛋白質として存在する・ハンチントン病モデルマウスを解析した結果、脳の領域特異的かつ週齢依存的に神経細胞の核内に凝集体が形成され、神経病理学的異常として観察を行ってきた。この異常な状態を解消する方法の一つとして細胞内発現抗体(イントラボディー)を用いた試みがなされている。本研究では、ハンチントン病の原因遺伝子転写翻訳産物であるハンチンチン蛋白質に対する抗体を取得することを目的としている。この抗体を細胞内で抗原抗体反応ができるように1本鎖として作らせるために、人工抗体ライブラリー(ラクダ抗体ライブラリー)から取得した。用いた抗原(ハンチンチン)は、神経変性疾患で観察されるアポトーシス関連蛋白分解酵素であるカスパーゼ1及び3の切断領域とハンチンチンN末端のリンコンビナント蛋白質の2種類を精製した。カスパーゼ切断部位領域に対する抗体遺伝子を検討したところ、7種類の1本鎖抗体遺伝子を得た。これらの抗体は、抗原結合活性に強弱があり、5種類の抗体は比較的強い反応性を示した。一方、ハンチンチンN末端は疎水性アミノ酸が多く、抗原は発現後大腸菌の不溶性画分に移行する。高濃度尿素存在下でインテイン結合蛋白質として溶出し、精製を行った。これらの抗原を用いて、ハンチンチンN末端(18アミノ酸)を抗原としてヒトFv抗体ライブラリーからの抗体遺伝子単離を開始した。

CAG リピート disease is a disease that is unique to neurological diseases and is a disease that is unique to the patient. Product には elongation ポリグルタミン lock が common の abnormal protein in the cell として presence する・ハンチントン disease モデルマウスをanalytic した results, 脳の domain-specific かつ Zhou 颢dependent に神The formation of agglomerates in the nucleus of cells and the abnormality of neuropathology can be observed and performed. Methods for resolving abnormal conditions include intracellular intracellular antibodies (イントラボディー) and using the method to eliminate them. The purpose of this study is to write down the causes and results of the disease. The ンチンチンproteinに対するantibodyをobtains the purposeとしている.このantibodyをIntracellular antigenantibody reactionができるように1本 lockとして为らせるたHe obtained the artificial antibody ライブラリー(ラクダantibody ライブラリー). It is used for いたantigen (ハンチンチン)は and the proteolytic enzyme related to the proteolytic enzyme related to neurological diseasesスパーゼ1 and び3のCut field とハンチンチンN terminal のリンコンビナントprotein の2 types をRefined した.カスパーゼCut site area に対するAntibody legacy 伝子を検したところ, 7 types of 1 main lock antibody legacy 伝子を得た. The strength of the antibody, the strength of the antigen-binding activity, and the strength and reactivity of the five types of antibodies are shown. On the one hand, the N-terminus of the ハンチンチンN-terminal aqueous アミノacid が多く, the antigen は発 appears and the insoluble cleavage of coliform bacteria にmigration する. In the presence of high-concentration urea, the binding protein of でインテイン can be dissolved and refined. The これらのantigen is made of いて, ハンチンチンN-terminal (18アミノ acid) antigenとしてヒトFv antibody ライブラリーからのantibodies 伝子単出をstart した.