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細胞内発現抗体を用いたCAGリピート病の発症解明と遺伝子治療への応用

使用细胞内抗体阐明 CAG 重复疾病的发病及其在基因治疗中的应用

基本信息

批准号：
12210139
负责人：
石黒啓司
金额：
--
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210139/
关键词：
ハンチントン病 CAGリピート細胞内発現抗体モデルマウス線状体

项目摘要

ハンチントン病(HD)はHD遺伝子のエクソン1の存在するCAGリピートの異常伸長が原因と考えられる神経変性疾患である。本研究は、この遺伝子産物の機能と構造の解明、及び遺伝子治療に向けたツールの作製を目的としている。はじめに、28、42、77及び107CAGリピートを持つヒトHD遺伝子エクソン1を各種発現ベクターに導入した。この発現遺伝子を大腸菌内に挿入して蛋白質の産生を試みたが、大腸菌自身の増殖が極めて悪かった。28CAGリピートを持つエクソン1に関してはわずかに蛋白質の産生を確認した。また、エクソン2-8とエクソン12-13を同様の発現系にて蛋白質の精製を試みた。その結果、エクソン12-13に関して大腸菌体に蛋白質を分泌していることが発現誘導剤(IPTG)の処理から判明した。この蛋白質はインテリンーキチン結合蛋白質との融合蛋白質であり、カラム中にて還元剤と静置することで目的の蛋白質を切断、精製することができた。SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動の結果、ほぼ95%以上の精製蛋白質と確認した。この領域は4ヶ所のカスパーゼ3切断部位が存在しており、HDの神経変性に関与した核内凝集体の形成に必須の蛋白質部位と考えられている。このリコンビナント蛋白質を用いてファージ抗体ライブラリーから抗体の精製を行っている。また、この蛋白質部分を用いてマウスとウサギに免疫を開始した。マウスは免疫後、脾臓を摘出して抗体遺伝子用cDNAライブラリーを作製し、ファージ抗体ライブラリーとして使用する。また、ウサギから免疫血清を作製してカスパーゼ3切断部位の構造解析及びカスパーゼ機能阻害活性の標準抗体とする。

The cause of chronic CAG disease (HD), HD disease, sexual disease, and sexual disease has been investigated. In this study, the machine can be used to explain and treat the information for the purpose of the treatment of the disease. Customers, 28, 42, 77 and 107CAG customers are responsible for the registration of all kinds of HD products. It was found that the protein was introduced into the bacteria, and the bacteria themselves did not proliferate very well. 28CAG is required to make sure that the protein is not available. This is the same as the protein test, which is the same as that in the same period. The results showed that the secretion of mycelium protein from 12-13% of the bacteria showed signs of infection (IPTG) and the diagnosis was confirmed. The fusion protein was isolated from the fusion protein, the fusion protein and the fusion protein. SDS- checked the results of the electrophoresis exercise and confirmed the results of more than 95% of the protamine test. It is necessary to determine the location of protein in the cut-off site of HD and the formation of nuclear agglutination collective. Please tell me that the antibody is fine and that the antibody is fine. The protein and protein parts were used to start the immunization program. After immunization, the spleen was immunized and the antibody was extracted from the spleen. The antibody was used in cDNA vaccine and the antibody was used in the spleen. The immune sera of mice and mice were used to analyze the cut-off sites and block the activity of standard antibodies.