細胞内発現抗体を用いたCAGリピート病の発症解明と遺伝子治療への応用

使用细胞内抗体阐明 CAG 重复疾病的发病及其在基因治疗中的应用

基本信息

  • 批准号:
    12210139
  • 负责人:
  • 金额:
    --
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
  • 财政年份:
    2000
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2000 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ハンチントン病(HD)はHD遺伝子のエクソン1の存在するCAGリピートの異常伸長が原因と考えられる神経変性疾患である。本研究は、この遺伝子産物の機能と構造の解明、及び遺伝子治療に向けたツールの作製を目的としている。はじめに、28、42、77及び107CAGリピートを持つヒトHD遺伝子エクソン1を各種発現ベクターに導入した。この発現遺伝子を大腸菌内に挿入して蛋白質の産生を試みたが、大腸菌自身の増殖が極めて悪かった。28CAGリピートを持つエクソン1に関してはわずかに蛋白質の産生を確認した。また、エクソン2-8とエクソン12-13を同様の発現系にて蛋白質の精製を試みた。その結果、エクソン12-13に関して大腸菌体に蛋白質を分泌していることが発現誘導剤(IPTG)の処理から判明した。この蛋白質はインテリンーキチン結合蛋白質との融合蛋白質であり、カラム中にて還元剤と静置することで目的の蛋白質を切断、精製することができた。SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動の結果、ほぼ95%以上の精製蛋白質と確認した。この領域は4ヶ所のカスパーゼ3切断部位が存在しており、HDの神経変性に関与した核内凝集体の形成に必須の蛋白質部位と考えられている。このリコンビナント蛋白質を用いてファージ抗体ライブラリーから抗体の精製を行っている。また、この蛋白質部分を用いてマウスとウサギに免疫を開始した。マウスは免疫後、脾臓を摘出して抗体遺伝子用cDNAライブラリーを作製し、ファージ抗体ライブラリーとして使用する。また、ウサギから免疫血清を作製してカスパーゼ3切断部位の構造解析及びカスパーゼ機能阻害活性の標準抗体とする。
ハ ン チ ン ト ン disease (HD) は HD posthumous son 伝 の エ ク ソ ン 1 の exist す る the CAG リ ピ ー ト の abnormal elongation が reason と exam え ら れ る 経 god - disorder で あ る. は, this study こ の heritage 伝 zi chan の interpret と の function structure, and traces of び 伝 に son treatment to け た ツ ー ル の cropping を purpose と し て い る. は じ め に, 28, 42, 77 and 107 the cag び リ ピ ー ト を hold つ ヒ ト HD heritage 伝 son エ ク ソ ン 1 を various 発 now ベ ク タ ー に import し た. こ の 発 now heritage 伝 son を coliform in に scions into し て protein の produce を try み た が が の raised colonization, coliform itself very め て 悪 か っ た. 28 the cag リ ピ ー ト を hold つ エ ク ソ ン 1 に masato し て は わ ず か に protein の produce を confirm し た. ま た, エ ク ソ ン 2-8 と エ ク ソ ン 12-13 を with others の 発 now is に て protein の refined を try み た. そ の results, エ ク ソ ン 12-13 に masato し て に coliform body protein secretion を し て い る こ と が 発 now induced tonic (IPTG) の 処 Richard か ら.at し た. こ の protein は イ ン テ リ ン ー キ チ ン binding protein と の fusion protein で あ り, カ ラ ム in に て yuan tonic と also let stand す る こ と で purpose の protein を cut, refined す る こ と が で き た. SDS-ポリア ポリア リ リア ア ア ドゲ ドゲ electrokinetic <s:1> results, ほぼ over 95% <s:1> refined protein と confirmation た た. こ は の field by 4 ヶ の カ ス パ ー ゼ が 3 cut parts exist し て お り, HD の 経 god - sex に masato and し た nuclear condensation within the collective の form に must の protein parts と え ら れ て い る. こ の リ コ ン ビ ナ ン ト protein を い て フ ァ ー ジ antibody ラ イ ブ ラ リ ー か ら antibody の refined を line っ て い る. The また and <s:1> protein parts を start with また て ウスとウサギに ウスとウサギに immunity を and た た. マ ウ ス は after immunization, splenic を pick the し て antibody heritage 伝 by using cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を as し, フ ァ ー ジ antibody ラ イ ブ ラ リ ー と し て use す る. ま た, ウ サ ギ か ら immune serum を cropping し て カ ス パ ー ゼ 3 の cut parts structure and び カ ス パ ー ゼ function resistance against active の standard antibody と す る.

项目成果

期刊论文数量(8)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Norihiko Nakano: "NTAKalpha and beta isoforms stimulate brest tumor cell growth by means of different receptor combinations."J.Biochem.. 127. 925-930 (2000)
Norihiko Nakano:“NTAKalpha 和 beta 同种型通过不同的受体组合刺激乳腺肿瘤细胞生长。”J.Biochem.. 127. 925-930 (2000)
  • DOI:
  • 发表时间:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
石黒啓司: "ニコチン性アセチルコリン受容体を介した遺伝子転写調節"自律神経. 37. 363-369 (2000)
Keiji Ishiguro:“通过烟碱乙酰胆碱受体调节基因转录”自主神经学 37. 363-369 (2000)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Takayoshi Shimohata: "Expanded polyglutamine stretches associated with CAG repeat diseases interact with TAFII130, interfering with CREB-dependent transcription"Nature Genetics. 26. 29-35 (2000)
Takayoshi Shimohata:“与 CAG 重复疾病相关的扩展多聚谷氨酰胺片段与 TAFII130 相互作用,干扰 CREB ​​依赖性转录”《自然遗传学》。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yoshiro Nagao: "DMSO and glycerol reduce bacterial death induced by expression of truncated N-terminal huntingtin with expanded polyglutamine tracts."Biochim.Biophys.Acta. 1502. 247-256 (2000)
Yoshiro Nagao:“DMSO 和甘油可减少由表达截短的 N 末端亨廷顿蛋白和扩展的聚谷氨酰胺束诱导的细菌死亡。”Biochim.Biophys.Acta。
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yoshihito Tokita: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes."J.Neuroscience. 21. 1257-1264 (2000)
Yoshihito Tokita:“损伤大鼠大脑和培养的星形胶质细胞中神经调节蛋白表达的调节。”J.Neuroscience。
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  • 资助金额:
    --
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    --
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    --
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知道了