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抗体CDRのアミノ酸配列と抗原特異性の相関関係の解析

抗体CDR氨基酸序列与抗原特异性的相关性分析

基本信息

批准号：
08272230
负责人：
黒澤良和
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

抗体は、HL鎖Vドメインの抗原相補性決定領域(CDR)と呼ばれる計6ケ所が形造る凸凹構造で抗原物質と安定な複合体を形成することにより抗原を特異性に認識する。このCDRのアミノ酸配列は事実上抗体毎に異なる高い多様性を示す。本研究ではそれ以外の部分(フレームワーク領域)のアミノ酸配列を一定にしたままCDRに多様な配列を導入した抗体ライブラリーの作製を行っている。抗体はFabの形でファージ膜上のcpIIIタンパクに融合した形で発現される。目的とする抗原とファージ抗体を結合させた後、ファージ粒子を回収することにより抗体遺伝子が得られる。本年度は(1)抗体としてFab、一本鎖Fv.Fvの形で発現されるベクターを作製し、相互に検討した結果、Fab型抗体が最も優れた性質を示すことが判明した。(2)抗HEL活性を示す多くの変異体の解析を行った。(3)様々なステロイド物質に対して異なる特異性を示す抗体を得てCDR配列と抗原特異性の関連を解析した。(4)H鎖CDRIIIの外側に位置する94番目の残基が抗原特異性に大きな影響を与えることを示した。(5)様々な抗原に対して特異性に結合する抗体が必ず含まれるライブラリーを作製するために6種類の抗体遺伝子を鋳型にライブラリー化できるように遺伝子を細工した。(6)error-prone PCRシステムを確立した。今後様々な抗原に対して必ず特異的に結合する抗体が含まれるライブラリーを作製するためにH鎖のCDRIIIへのランダム配列の導入-抗体単離後error-prone PCRを行い、抗原結合力の高まったクローンを得るシステムを確立する。

Antigen complementarity determination domain (CDR) of antibody and HL-lock protein is recognized by antigen specificity. The CDR sequences are highly variable in the case of antibodies. In this study, we conducted a series of experiments on the antibody sequence in different regions, including the introduction of multiple CDR sequences. Fab protein is produced by fusion of protein and protein on the membrane. Objective: Antigen binding, antibody binding, antibody binding This year, it was found that Fab antibodies and Fv antibodies were the best in the study. (2)Anti-HEL activity was demonstrated by the analysis of different species. (3)The specificity of the antibody was determined by CDR alignment and antigen specificity analysis. (4)H The 94 residues at the outer position of CDRIII have a significant impact on antigen specificity. (5)Antigen specific binding is required for the production of six types of antibody fragments. (6)error-prone PCR was established. In the future, antibodies that bind specifically to antigens will be introduced into the system containing the sequence of CDRIII sequences. The error-prone PCR after antibody isolation will be performed to establish the system for high antigen binding capacity.