発生工学を応用したα-フェトプロティンの糖鎖構造および機能の解析

点击翻译按钮获取中文摘要

1.AFP糖鎖の組織特異性およびがん性変化の解析C_<57>BL_6マウスよりヒトAFP cDNAおよびβ-actin promoter/enhancerを用いて作製したヒトAFPを恒常的に産生するトランスジェニックマウス(TG-3)の種々の組織細胞を培養し、培養上清中のAFPのアイソフォームを4種類の異なるレクチンを用いるレクチンアフィニティー電気泳動で解析した。ConA、LCA、E-PHA、およびallo Aの4種類レクチンを用いた電気泳動で、肝臓、脾臓、脳、腎臓、肺、心臓由来のAFPにそれぞれ数種類のアイソフォームが確認され、組織により微細に糖鎖構造が違うことが明らかになった。肺がんでは、AFPの糖鎖にフコース残基が付加されることによるがん特異的なphenotypeの変化が確認された。2.実験的甲状腺炎モデルを用いたAFPの免疫抑制作用の解析TG-3マウスおよび対照マウスの足踵および下腿皮下に、精製ブタ甲状腺ペルオキシダーゼ(TPO)とアジュバントとのエマルジョンを免疫し甲状腺炎を惹起した。甲状腺炎の発症の有無を組織学的に判定した。また、TG-3マウスおよび対照マウス脾細胞のin vitroにおける各種mitogenに対する幼弱化を、^3H-thymidineの細胞への取り込み量で調べた。TPOを3回免疫した対照マウス8匹中7匹で、弱〜中程度の単核球の湿潤を伴う甲状腺炎が認められたが、TG-3マウスでは8匹中1匹にのみ発症が認められた。AFPは、対照およびTG-3マウスの脾細胞のPHAによる幼若化を濃度依存的に抑制した。しかし、TG-3マウスの脾細胞のPHA応答は対照マウスに比し有意に低下していた。