トウモロコシ性決定遺伝子Silklessクローニングの試み

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これまでに、約100万個の独立したクローンからなるear cDNAライブラリーをスクリーニングし、TS2タンパク質のカルボキシル末端側半分の領域と相互作用するポジティブクローン6個を得た。これらは未知のタンパク質をコードする物2個、シャペロニンであるDnaJの植物におけるホモログをコードする物3個、及び酵母の細胞増殖に関与するprolifera proteinと高い相同性を示す物の1つに分類された。TS2タンパク質のアミノ末端側半分の領域と相互作用するタンパク質のスクリーニングも行ったが、false positive クローンが大量に得られた。現在、TS2のアミノ末端側の様々な領域を欠失させたスクリーニング用のプラスミドを用い、アミノ末端側のどの部分がfalse positiveを生じる原因となっているのか解析している。発現量の低いcDNAを得るには合計して200万のの独立したcDNAクローンをスクリーニングする必要がある。そこで、さらに、100万の独立したクローンからなるcDNAを作製した。今後このcDNAライブラリーもスクリーニングする予定である。また、得られたポジティブクローンはcDNAの一部分しか持っていないので、ラムダファージベクターを用いて作製した。era cDNAライブラリーをスクリーニングし、cDNAの全長を明らかにする予定である。その後、cDNAがコードするタンパク質を大腸菌内で合成させて精製し、免疫沈降法などの方法により実際にそのタンパク質がTS2タンパク質と相互作用するか確認する。また、それらのcDNAをトウモロコシの染色体上にマップし、SK1遺伝視座近傍に位置する物がないか調べる計画である。