マウスX染色体の活性変化とXist遺伝子のモザイク状メチル化

小鼠 X 染色体活性变化和 Xist 基因的镶嵌甲基化

• 批准号: 09263201
• 负责人: 高木 信夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263201/
• 关键词: Xist; メチル化; X染色体; マウス; 不活性化

Xist遺伝子の5領域に認められる3通りのメチル化パターンを中心に、X染色体の不活性化現象の研究を進めた。(1)免疫手術により胚盤胞から分離した内部細胞塊への栄養芽細胞の混入を検出する系をEndoA遺伝子をマーカーとして確立した。今後、栄養芽細胞の混入と性のチェックと並行して、HpaII PCRによりXist5'部位にあるCpG配列のメチル化の状態を雄について検討する。(2)T(X;16)16H転座を持つ雌マウスで、正常X染色体が不活性化する原因を検討した。受精後6.5日〜7.5日の胚体部では、転座XのXistアレルは発現しないため、正常Xが優先的に不活性化すると判断した。しかし、X連鎖lacZトランスジーンを用いると、転座雌でも20-30%の細胞が染まった。従って、(1)転座染色体は不活性化しにくく、lacZ遺伝子の発現抑制が遅れる、(2)転座X染色体は選ばれながら不活性化されないという可能性が浮上した。不活性化センターの機能が転座によって影響を受けたと考えられるが、更に検討した結果、Xistなど不活性化センターの中央にある遺伝子ではなく、転座点に原因があることが示された。(3)マウス・ヒト細胞雑種CF150では、ヒト染色体として唯1本含まれるX染色体は不活性でありながら、ヒストンH4はアセチル化していない。所が、HeLa細胞と融合するとH4はアセチル化されることが判明した。この系は不活性化におけるヒストンH4の役割とその制御の解析に役立つものと考え検討を続けている。

The study of X chromosome inactivation in 5 domains of Xist gene was carried out. (1)Immunosurgical separation of blastoderm cells and intergrowth of vegetative bud cells is established in the system of EndoA gene. In the future, the mixed nature of cultured bud cells, HpaII PCR, CpG alignment, and the status of CpG transformation will be discussed. (2)T(X;16) 16H locus is not active, and the reason for the inactivation of normal X chromosome is discussed. From 6.5 days to 7.5 days after fertilization, the embryo body of Xist and Xist will appear, and the normal X will be preferentially inactivated 20-30% of the cells are stained with X-linked lactones. (1) chromosome inactivation at locus A, inhibition of gene expression at locus Z, and (2) chromosome inactivation at locus X. The function of inactivation is affected by the change of position. The result of the change of position is discussed. The reason of inactivation is shown. (3)The cell line CF150 is inactive on chromosome 1 and inactive on chromosome 2. The fusion between HeLa cells and H4 cells was identified. This system is not activated. It is deactivated. It is deactivated. It is deactivated.

项目成果

Yoshida,I.et al.: "Reactivation of an inactive human X chromosome introduced into mouse embryonal carclnama cells by microcell fusion with persistent expression of Xist." Experimental Cell Research. 230. 208-219 (1997)

Yoshida,I.et al.：“通过持续表达 Xist 的微细胞融合，重新激活引入小鼠胚胎癌细胞的失活人类 X 染色体。”

Takagi,N.: "Mouse Cmbryonal carcinoma cell-somatic cell hybrids as experimental tools for the study of cell differentiation and X chromosome activity." Cancer Genetics and Cytogenetics. 93. 48-55 (1997)

Takagi,N.：“小鼠胚胎癌细胞-体细胞杂交体作为研究细胞分化和 X 染色体活性的实验工具。”

Ogura,H.et al.: "Translocation breakpoint possibly predisposesto X chromosome issctivation nonrandom in mouse embry as bearing Searle's T(X;16)16H translocation" Cytogenetics and cell Genetics. in press.

Ogura, H.等人：“易位断点可能会导致小鼠胚胎中 X 染色体非随机激活，因为带有 Searle 的 T(X;16)16H 易位”细胞遗传学和细胞遗传学。