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ゲノムインプリンティングのモデル系としてのX染色体不活性化の研究

X染色体失活作为基因组印记模型系统的研究

基本信息

批准号：
05152003
负责人：
高木信夫
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒトの染色体としては不活性Xのみを1-3本持つマウス細胞CF-150をUCLAのDr.T.K.Mohandasより供与された。ヒト不活性X上のHprt遺伝子が活性化したために微小細胞融合によってA9細胞に導入が可能になったものである。複数のヒトX染色体はHprt遺伝子の発現が十分でないことに原因があると考えられている。最初に、複製バンド法と染色体ペインティング法により検討した結果、CF-150のヒト染色体は長腕は晩期複製型であるが、短腕はかなり同調的に複製していた。Vivoにおいても似た傾向があるため、これをヒト不活性Xと判断した。2.CF-150をコルセミド処理し、微小核を形成させ、EC細胞株OTF9-63にヒト不活性X染色体の導入を試みた。PEGによる融合後HAT培地による選択を行ったところ11個のクローンが得られた。BrdUの取り込みを利用した複製バンド法とペインティング法によって、導入されたX染色体はintactあるいは長腕の末端が僅かに欠失しており、活性化していることが判明した。これらの細胞では細胞周期が多少長くなり、コロニーの周辺に内胚葉が分化することから、分化能もやや増していると推測される。3.CF-150を^<60>Coで照射(5,000r)し、直ちにA9細胞と融合し、ヒトX染色体を部分的に含むradiation hybridsの作成を試みた。現在までにHAT抵抗性の11クローンを分離した。4クローンには部分的に晩期複製する染色体が存在したので、ペインティングで確認したところ、すべてヒトX由来であった。残る7クローンには晩期複製部位をもつ染色体は認められなかったが、ヒトXの存在を検討するためのペインティングはまだ実施していない。4.PSA1やOTF9-63などEC細胞と正常雌体細胞を融合すると、後者の不活性X染色体は活性化する。この時に、インプリンティング様の記憶も消え去るか否かについては知見が無い。そこで、PSA1とT16H転座が存在するために常に不活性となるRb2染色体(第2染色体とXとの動原体融合産物)をもつリンパ球を融合させて、近4培体のEC様細胞雑種を得た。この細胞に胚様体形成を介して分化を誘導すると、再びX染色体の不活性化が起きる。Rb2染色体が不活性になった細胞はPSA1由来の正常Xが不活性となった細胞の約50%であった。T16H転座染色体が不活性になった細胞は5%以下で、転座による不活性化センター(Xic)あるいはその下部の構造に変化が起きていることを示唆している。

1. ヒトのChromosome Inactive It is possible to introduce microcell fusion into A9 cells by inactivating the Hprt residue on the inactive X. Plural のヒトX chromosome はHprt legacy 伝子の発 appear が十でないことにreason があると考えられている. The result of the original copying method and chromosome copying method, CF-15 0のヒトchromosome is a long-armed and late-stage replicating type, and a short-armed and homologous replicating type. Vivo's においてもsimilar tendency があるため、これをヒト inactive 2. CF-150 をコルセミド treatment, micronucleus formation, EC cell line OTF9-63, inactive X chromosome introduction test. After the fusion of PEG and HAT, it is possible to select 択を行11 pieces of PEG. BrdU's り込みを uses した to copy バンド法とペインティング法によって, import されたX dyeing The end of the body's long wrist is only the end of the body's intact, and the activation is clear. How long is the cell cycle? How long is the cell cycle? How long is the cell cycle? The differentiation of the embryonic leaves is a matter of speculation, and the differentiation ability is a matter of speculation. 3. CF-150を^<60>Co was irradiated (5,000r), fusion was performed on A9 cells, and radiation hybrids containing part of the X chromosome were produced and tested. Now it is resistant to HAT resistance 11 クローンを separate した. 4. Part of the クローンには part of the に晩 stage replication するchromosome exists したので,したところ, すべてヒトX origin であった. The remaining part of the replication of the 7-year-old chromosome is the chromosome of the 7-year-old chromosome. The existence of ヒト4. PSA1 and OTF9-63 are used to fuse EC cells with normal female cells, and the inactive X chromosome of the latter is activated.この时に、インプリンティング様のMemoryも无え去るか不かについては知见が无い.そこで、PSA1とT16H袢がexisting するためにusually inactive となるRb2 chromosome (second stain The fusion product of body X and kinetoplasma) is the fusion product of させて and nearly 4 cultured EC cells are obtained. The embryonic body is formed, the cells are mediated, the differentiation is induced, and the X chromosome is inactivated. About 50% of normal X-inactive cells from which Rb2 chromosomes are inactive are PSA1 cells. T16H The chromosome inactivation rate of T16H is less than 5% in cells, and the inactivation rate of T16H chromosome is less than 5%.ター(Xic)あるいはその Lower structure に変化が出きていることをshows 唆している.