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染色体imprintingと遺伝子不活性化の基礎研究

染色体印记与基因失活的基础研究

基本信息

批准号：
04152001
负责人：
高木信夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152001/
关键词：
マウス X染色体不活性化インプリンティング胚幹細胞

项目摘要

1.Xist遺伝子のクローニング15kbとされるcDNAの約8割をクローン化し、シーケンスも終了した。現在、5'領域のゲノミッククローンの分離に力を注いでいる。2.Xist遺伝子がX染色体不活性化センター(Xic)に相当するか否かを検討するために、ECCx雌体細胞の系で不活性Xが活性化する過程でのXisT遺伝子の発現変化をRT-PCR法で調べている。再活性化には細胞融合後4-5日を要するがXistの発現もこれにほぼ並行して消失した。現在、in situ hybridization によって更に細かい点の解析を行っている。3.Xistとは別にXicを分離するための実験材料として生殖細胞キメラ形成能の高いES細胞株の樹立を試みている。既に染色体転座を持つものも含め50余株の樹立に成功した。雄2株についてはキメラ形成能を調査し、いずれも生殖細胞に組み込まれることが明らかになった。4.マウス雌胚発生では父由来のX染色体がまず胚体外部で不活性化し、次いで胚体部ではランダムな不活性化が起きる。この選択的な不活性化現象にはXicにあるimprintingが関与し、1-2日後imprintingが消えるためにランダムになると考えられていた。我々の樹立した雌型ES細胞6株を用いて培養下で胚様体を形成させX染色体の不活性化を起させる系で検討したところ30回の継代培養後にも胚体外部に当たる部分では父由来Xが不活性となりこのimprintingは従来想定されていた程には不安定なものではないこと、そしてこのimprintingに対する反応が組織によって違うらしことが明らとなった。

1. Xist cDNA fragment length of 15kb is about 8 bp. Now, 5'domain of the separation of the force of the note in the middle. 2. The expression of XisT gene in ECCx female cell lines during the process of X inactivation was regulated by RT-PCR. The reactivation of Xist occurs 4-5 days after cell fusion and disappears. Now, in situ hybridization, we're going to have to analyze the details. 3. Xist and Xic are isolated from germ cells, and ES cell lines with high productivity are established. More than 50 plants were successfully established in the chromosome loci. 2 male strains were investigated for their ability to form germ cells. 4. The female embryo is born from the X chromosome of the father's origin, and the outer part of the embryo is inactivated. The second part of the embryo is inactivated. The selected inactivation phenomenon is Xic, 1-2 days after imprinting, it will disappear. 6 female ES cells were established and cultured in vitro. The embryo formation, X chromosome inactivation, X chromosome inactivation, X chromosome inactivation