出芽酵母の複製開始複合体の構成因子の解析

酿酒酵母复制起始复合物的组成因素分析

• 批准号: 09263210
• 负责人: 小布施 力史
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263210/
• 关键词: 染色体; DNA複製; フットプリント; 細胞周期; 出芽酵母; 分子生物学

1.研究目的:我々はマルチレプリコンを持つ真核生物の染色体複製のモデル系として出芽酵母第六染色体の複製開始点の解析を網羅的に行っている。これまでに、使用頻度や複製開始時期はそれぞれの複製開始領域で異なり、確実な染色体複製を行うために染色体レベルで何らかの制御を受けていることが明らかになってきた。本研究課題は第六染色体上の9つある複製開始領域の複製開始活性を決める因子を明らかにするために、in vivo UVフットプリント法によって複製開始複合体に関わる因子の同定と、各複製開始領域内の必須配列に形成される複製開始複合体と複製開始活性の相関について解析を行った。2.研究成果:UVフットプリント法により複製開始必須領域に結合するORC複合体をin vivoで解析することに成功した。この解析により、G1期に形成される複製前複合体(pre-RC)の形成に伴いORC複合体と必須配列の結合状態は弱くなること、この結合状態を維持するためにはCdc6およびMcm5の活性が必要であることを明らかにした(論文を投稿中)。また、pre-RCは複製開始と同時に崩壊すること、崩壊にはCdc7キナーゼの活性が必要であることが明らかとなった。このことからpre-RCの崩壊が複製開始の重要なステップであることが示唆された。さらに、pre-RCはS期初期に開始する領域ではG1期の直前にすばやく形成されるが、S期の終期に複製するものはS期の中頃までの長い時間をpre-RCの形成に要することが明らかとなった。複製開始の順序は、pre-RCが形成される時点ですでに決定されていることから、S/M期サイクリンのキナーゼ活性の変化によって直接制御されているのではなく、染色体の高次構造がpre-RC形成のための分子集合の速度あるいはpre-RCの崩壊のためのCdc7キナーゼのaccesibilityを規定する事によって決定されていることが示唆された(論文を投稿準備中)。

1. The purpose of this study is to analyze the starting point of chromosome 6 replication in Saccharomyces cerevisiae. You need to make sure that you need to make sure that the chromosome copy is completed, and that you need to make sure that you want to start a copy of the chromosome, and make sure that the copy of the chromosome is completed. In this study, the start of the 9-stage replication on chromosome 6, the start of the active copy, the start of the in vivo UV copy, the start of the complex, and the start of each field must be arranged to form the start of the replicate. the start of the complex must be matched to form the start of the clone. two。 Research results: the beginning of UV replication must be based on the domain combination of ORC complex and in vivo analysis. In order to form a pre-replication copy (pre-RC) in G1 phase and to form an ORC complex in G1 phase, it is necessary to configure the combination status to maintain the activity of both weak and negative Mcm5 (in the submission of the article). At the same time, it is necessary to verify that it is necessary to make sure that the pre-RC and Cdc7 copies are activated at the same time. It is important to start a copy of the pre-RC crash. Please indicate that you are instigated. At the beginning of the first phase of the pre-RC

项目成果

M.Yamashita: "The efficiency and timing of initiation of replication of multiple replicons of S.cerevisiae chromosome VI" Genes to Cells. 2. 655-665 (1997)

M.Yamashita：“酿酒酵母 VI 号染色体多个复制子的启动复制的效率和时机”基因到细胞。