ヒト細胞におけるM期から複製開始にいたるまでの染色体構成因子のプロテオーム解析

人类细胞从 M 期到复制起始的染色体组成因子的蛋白质组分析

基本信息

批准号：
19038002
负责人：
小布施力史
金额：
$ 5.5万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本課題は、ヒト染色体の構成因子の量的な変動を、質量分析をもちいたプロテオーム解析により網羅的に明らかすることを目的としている。19年度までに、蛋白質の定量解析のインフォマティックス技術を沖縄大学院大学先行事業の長尾博士とともに開発した。これに基づいて、20年度は、間期からM期において、染色体の維持伝達、情報発現調節などに深く関与するヘテロクロマチン構成因子のHP1に着目し、その結合因子の網羅的な解析を行った。また、その中からいくつかの因子について個別の機能解析を行い、新たな染色体機能を浮き彫りにした。さらに、核内構造も含めたプロテオーム解析のための技術開発も行った。具体的には、以下の通りである。1)新たに同定したHP1相互作用因子について、野生型のHP1あるいは構造情報に基づいて作成した変異体との結合をインォマティクスにより定量的に比較し、HP1への結合様式の違いにより6つのグループに分けることができた。2)多くのHP1結合蛋白質がPxVxLモチーフを介してHP1と結合するのに対して、ジンクフィンガーモチーフを介してHP1と結合する新規HP1結合タンパク質を見いだした。3)この新規HP1結合因子の発現を抑制したところ、HP1の局在は乱れ、セントロメアコヒーションの異常、動原体形成の異常、分裂期染色体の成熟の異常が観察された。また、これらの染色体機能には新規因子とHP1との結合が寄与していることが示唆された。4)核膜因子の可溶化法を確立し、核構造と染色体の機能調節という見地からのプロテオーム解析の可能性を示すことができた。また、Flagタグを付加した6種類の核膜蛋白質をそれぞれ発現する細胞株を樹立し、可溶画分からそれぞれの核膜因子複合体を免疫精製し同定することができた。その結果、ある種のクロマチンリモデリングファクターなど、染色体因子が核膜と相互作用することが示唆された。

该目标是通过使用质谱法分析蛋白质组学分析来全面揭示人类染色体组成因子的定量变化。到2019年，我们通过冲绳大学的高级项目的Nagao博士开发了用于定量蛋白质分析的信息学技术。基于此，在2020财年，我们专注于HP1，HP1是一种异染色质组成因子，与信息表达的染色体维持和调节，从相间到M相深入调节，并对其结合因子进行了全面分析。此外，对几个因素进行了几个因素的个人功能分析，突出了新的染色体功能。此外，开发了用于蛋白质组分析的技术，包括核结构。具体而言，以下内容如下。 1）与野生型HP1或基于Inomatics结构信息创建的突变体相比，新近鉴定的HP1相互作用因子被定量地进行了比较，而新近鉴定的HP1相互作用因子的结合可以根据与HP1的结合模式的差异分为六组。 2）我们发现了一种新型的HP1结合蛋白，该蛋白通过PXVXL基序结合HP1，而许多HP1结合蛋白通过锌指基序结合HP1。 3）当抑制了这种新型HP1结合因子的表达时，HP1定位被破坏，并观察到异常的中心质体相干，异常的丝粒形成和有丝分裂染色体的异常成熟。还建议新因素和HP1之间的结合有助于这些染色体功能。 4）我们已经建立了一种溶解核膜因子的方法，并能够从调节核结构和染色体功能的角度证明蛋白质组学分析的可能性。此外，还建立了表达六种具有标记标签的六种类型的核膜蛋白的细胞系，并且可以免疫菌株并从可溶性分数中鉴定出相应的核膜因子复合物。结果表明，染色体因子（例如某些染色质重塑因子）与核膜相互作用。