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体内時計の光位相同調とメラトニン出力系の調節メカニズム

生物钟的光相位同步及褪黑激素输出系统的调节机制

基本信息

批准号：
11233202
负责人：
深田吉孝
金额：
$ 39.74万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を遂行し、下記の成果を得た。1.光依存的転写調節に関わる遺伝子配列(光応答エレメント)を同定するため、光に応答するピノプシン遺伝子のプロモータの解析を行った。その結果、18塩基からなる光応答エレメントを同定することに成功した。また、ゲルシフト解析の結果、この光エレメントに作用する因子は、肝臓等の種々の臓器に発現する転写抑制因子であることがわかった。2.概日時計発振系におけるMAPキナーゼの生理的役割の解明を目指して、咋年度に続きMAPキナーゼの標的分子を探索した。In vitroでのキナーゼアッセイの結果、BMAL1に加え、クリプトクローム(CRY1およびCRY2)がMAPキナーゼによってリン酸化されることが判明した。転写アッセイに基づく機能解析の結果、MAPキナーゼによるリン酸化に伴ってクリプトクロームの転写抑制能が修飾されることが分かった。そこで、リン酸化部位を特異的に認識する抗体を作製し、このようなリン酸化が生体内でおこっているかどうかを調べた。その結果、培養細胞において強制発現させたCRY1およびCRY2の特定のアミノ酸残基がMAPキナーゼによってリン酸化されることが明らかとなった。3.エクソロドプシンプロモータは、ゼブラフィッシュにおいて松果体特異的な遺伝子発現を誘導する。このプロモータを利用し、概日時計の発振における時計遺伝子産物(BMAL1およびBMAL2)の機能を明らかにすべく、これらBMALのドミナントネガティブ体を松果体特異的に発現するトランスジェニックゼブラフィッシュを複数系統樹立した。現在、これら個体のメラトニンリズムの解析を進めている。これと並行して、エクソロドプシンプロモータにおいて、松果体特異的な遺伝子発現を誘導するエレメントを決定しPIPE(Pineal Expression Promoting Element)と命名した。

Submit the application to document the implementation plan of the study and record the results. 1. Light dependent modulation is associated with the determination of the distribution of information and the analysis of the distribution of information. The results of the 18-day survey were successful. The results of the analysis, the effect of the light on the gene expression and the inhibition factor of the gene expression of the gene expression are as follows: 2. The aim of this paper is to explore the molecular basis of the physiological function of MAP in the future. In vitro, the results of BMAL1, CRY1, CRY2 and MAP are clear. The results of functional analysis of the matrix, MAP, pH, pH In vivo, the antibody is regulated by the specific site of acidification. As a result, cell culture was stressed to produce CRY1 and CRY2 with specific acid residues. 3. Pineal-specific gene expression is induced in the brain. The function of these timer products (BMAL1 and BMAL 2) is described in detail. The function of these timer products (BMAL1 and BMAL2) is described in detail. The function of these timer products (BMAL1 and BMAL2) is described in detail. The function of these timer products (BMAL 2) is described in detail. Now, the individual's profile is analyzed. Pineal Expression Promoting Element (PIPE) is a pineal Expression Promoting Element (PIE).