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三量体G蛋白質の分子間認識における修飾脂質の立体構造と機能相関

修饰脂质在三聚G蛋白分子间识别中的三维结构和功能关系

基本信息

批准号：
08260202
负责人：
深田吉孝
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を進め、以下の知見を得た。1.三量体G蛋白質のγサブユニットには、現在までに10種類以上のサブタイプが報告されている。このうち、視細胞のG蛋白質トランスデューシン(Tα・Tβγ)のγサブユニットはC末端システイン残基がファルネシル化(C15H25)されているのに対し、他のG蛋白質γサブユニットの多くはゲラニルゲラニル化(C20H33)されている。本研究では、修飾イソプレノイドの鎖長がβγ複合体の機能に及ぼす影響を明らかにする目的で、本来ファルネシル化されるTβγを人工的にゲラニルゲラニル化することを試みた。その結果、ゲラニルゲラニル化γとファルネシル化γを約9:1の割合で含む変異Tβγを作成することに成功した。そこでまず、得られた変異Tβγとファルネシル化Tβγの視細胞外節膜に対する親和性を比較したところ、前者の方が後者よりも外節膜に対して高い親和性を示すことが判明した。次に、Tα-Tβγ間の相互作用に及ぼす修飾イソプレノイドの鎖長の効果を検討する目的で、TαのGTPγのS結合反応、および百日咳毒素によるTαのADPリボシル化反応を指標として、これら二種類のTβγの促進効果を比較した。その結果、いずれの反応においても変異Tβγはファルネシル化Tβγよりも高い促進能力を示すことが明かとなった。したがって、修飾イソプレノイドの鎖長の違いによってTβγ複合体の視細胞外節膜への結合の強さ」と「サブユニット間の相互作用の強さ」の両方が変化すると考えられた。2.藤吉好則教授(京大・理)との共同研究により、インタクトな修飾脂質をもつTα-Tβγの2次元結晶を脂質膜上に作成した。現在、まだ分解能は低いが、極低温電子顕微鏡による観察像からTα-Tβγのプロジェクションマップを計算している。今後、分解能の向上とともに、原子座標のフィッティングを行う。

The following observations were obtained along with the progress of the study described in the submission application. 1. More than 10 kinds of γ-ray proteins are reported in this paper. In this case, the G protein of the retinoid cell is classified into three groups: T α·Tβγ, Tα·Tβ, Tα·T α, Tα·Tβ, T α·T α, T α·T α, T α·T β, T α·T α·T α, T α·T β, T α·T α, T α·T α·T α, T α·T α·T β, T α·T α·T α, T α·T α·T α, T α·T β, T α·T β, T α·T α·T αThe purpose of this study is to clarify the function of the βγ complex and its influence on the growth of the βγ complex. The results show that the ratio of the two groups is about 9:1, and the ratio of the two groups is about 9:1. The affinity of T βγ to the outer segment of the optic cell was compared with that of Tβγ to the outer segment of the optic cell. The interaction between Tα and Tβγ and the effect of Tβ modification on the growth of T α and T α were studied. The result is that the T β γThe interaction between the Tβγ complex and the outer segment membrane of the optic cell was studied. 2. Professor Yoshinori Fujiyoshi (Kyoto University) has jointly studied the formation of two-dimensional crystals on lipid films by modifying lipids. At present, the decomposition energy of Tα-Tβγ is calculated by electron microscope at low temperature. In the future, decomposition energy can be used to move upward, atomic coordinates can be used to move upward.