脂質修飾された視細胞G蛋白質による光情報変換機構の解析

脂质修饰光感受器G蛋白光信息转换机制分析

• 批准号: 05271211
• 负责人: 深田 吉孝
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05271211/
• 关键词: 光情報伝達; 視細胞; 光受容蛋白質; G蛋白質; トランスデューシン; 脂質修飾; ファルネシル化; メチル化

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を進め、以下の知見を得た。1.ウシ視細胞のG蛋白質トランスデューシン(Tαβγ)のαサブユニット(Tα)のN末端には四種類の脂肪酸が結合している。このうち不飽和脂肪酸C14:1およびC14:2の構造を決定するため、各種異性体を化学合成して天然物と比較解析した結果、それぞれ5-cisおよび5-cis、8-cisであることが判明した。この珍しい脂肪酸修飾の生理的意味を知るため、TαのN末端領域に対応する脂肪酸付加ペプチドを合成し、Tαβγに対する効果を調べた。その結果、脂肪酸の違いによってTβγに対するTαの親和性が異なる可能性が示唆された。2.TγのC末端Cys残基はS-ファルネシル化され、α-カルボキシル基はメチル化されている。このメチル化の役割を知るために、メチル化型Tβγと脱メチル型Tβγを分離した。この両者の機能を比較した結果、Tγのメチル化は、ファルネシル化と相加的にTαとTβγの間の相互作用を増強し、受容体-G蛋白質間の情報伝達を加速することがわかった。また、Tγのメチル化は不可逆であり、生体内でTγはほぼ完全にメチル化されていることが示唆された。3.桿体と錐体の生理機能の違いが、光受容体のレベルでどのように説明できるかを調べるため、ニワトリ網膜からロドプシンと緑錐体光受容体を精製した。両者の光反応過程を解析した結果、生理活性をもつメタII中間体の生成・崩壊の時定数に顕著な違いがあることを見出した。現在、さらに定量的な解析を行っている段階である。4.桿体Tαと錐体TαのcDNA塩基配列に基づいて、これらを特異的に認識するペプチド抗体を作成した。これらの抗体を用いて生化学的、免疫組織化学的検討を行った結果、色感受性の異なる四種類のニワトリ錐体は、共通(42kDa)のG蛋白質αサブユニットをもっていることが示された。

The delivery of the application record of the study has been completed in the course of the study, and the following comments have been received. 1. Four kinds of fatty acids (T α β γ) N terminal fatty acids (T α), N terminal fatty acids (T α) and N terminal fatty acids (T α) were detected. The results of chemical synthesis of fatty acids, 5-cis compounds, 5-cis, and 8-cis compounds were determined. The physiological meaning of fatty acid modification is to know, T α, N-terminal fatty acid, fatty acid synthesis, T α β γ, fatty acid synthesis, T α β γ fatty acid synthesis. The results, fatty acids, T β, γ, T α, and the possibility of sexual stress were all indicative of instigation. 2. The C-terminal Cys residues of T γ, S-terminal, S-terminal and α-terminal of T, γ, C-terminal, C-terminal, S-terminal, S-terminal, C-terminal, C-terminal, S-terminal, α-terminal, S-terminal and α-terminal. In this paper, the operation is used to cut the type of T β γ separation, the type of T β and the type of T β γ separation. The recipient was able to compare the results of the test results, the T γ-ray chemical reaction, the T α-T β-γ interaction and the receptor-G protein interaction, which accelerated the detection of the receptor-G protein. In vivo, T γ radiation is irreversible, and T γ radiation in vivo is not reversible. 3. The physiological mechanism of the body is sensitive, the light-tolerant body is sensitive, the light-tolerant body is sensitive, the network membrane is sensitive, the light-tolerant body is sensitive. The results of photoperiod response process analysis and physiological activity assay were used to determine the number of times of body collapse in II. At present, there is a quantitative analysis of the number of lines that need to be analyzed. 4. Body T α

项目成果

Yoshitaka Fukada: "Methods in Enzymology:“Lipid Modifications of Proteins"(Casey,P.J.& Buss,J.E.,eds.)担当項名:Prenylation and carboxyl methylation of G protein γ subunit." Academic Press(in press), (1994)

Yoshitaka Fukada：“酶学方法：“蛋白质的脂质修饰”（Casey, P.J. & Buss, J.E.，编辑）章节标题：G 蛋白 γ 亚基的异戊二烯化和羧基甲基化。”学术出版社（正在出版），（1994 年） ）

Yoshinori Shichida: "Nanosecond laser photolysis of iodopsin,a chicken red-sensitive cone visual pigment." Biochemistry. 32. 10832-10838 (1993)

Yoshinori Shichida：“碘紫红质的纳秒激光光解，碘紫红质是一种鸡红色敏感的视锥视觉色素。”

Koichi Kokame: "Identification of the α-subunits of rod and cone transducin in chicken photoreceptor cells." Exp.Eye Res.57. 135-140 (1993)

Koichi Kokame：“鸡感光细胞中视杆细胞和视锥细胞转导蛋白 α 亚基的鉴定。Exp.Eye Res.57 (1993)。

Yoshitaka Fukada: "“Frontiers of Photobiology"(A.Shima et al.,eds.)担当項名:Roles of lipids linked to α-and γ-subunits of photoreceptor G protein." Elsevier, 6 (1993)

Yoshitaka Fukada：““光生物学前沿”（A. Shima 等人编辑）标题：与光感受器 G 蛋白 α 和 γ 亚基相关的脂质的作用。”Elsevier，6 (1993)

Yoshitaka Fukada: "Effects of carboxyl methylation of photoreceptor G protein γ-subunit in visual transduction." J.Biol.Chem.in press. (1994)

Yoshitaka Fukada：“光感受器 G 蛋白 γ 亚基的羧基甲基化对视觉转导的影响。”J.Biol.Chem.in press（1994 年）。