ゲノム防御機構とがん抑制蛋白p53

基因组防御机制和抑癌蛋白p53

• 批准号: 12143205
• 负责人: 山泉 克
• 金额: $ 23.81万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12143205/
• 关键词: 複製後修復; Rad18; Rad6; ユビキチン化; 細胞内局在; TLS; polη; PCNA; ゲノム不安定性; 発現調節; UV^SS; TCR; ゲノム不安定化; p53; MAPキナーゼ; p38; ES細胞; ノックアウトマウス

紫外線により誘導されるピリミジン2量体は他の損傷と比較して修復効率が悪く、DNA複製の進行を阻害することが多い。Rad18はRad6と共同して停止部位でのPCNAをモノユビキチン化することで、損傷乗り越え合成に関与するポリメラーゼηの誘導に関与することを示した。Rad18蛋白質はSDS-PAGEにおいて2本のバンドとして検出される。このうち85kdに相当する分子種は75kdに相当するもう1本の分子種がモノユビキチン化したものであることを質量分析により明らかにした。Rad18のモノユビキチン化機構を解明するため、分子内のRINGフィンガー領域(RFD)及びZnフィンガー領域(ZFD)に点突然変異を導入し、これらの変異Rad18蛋白質のモノユビキチン化を野生型と比較検討した。野生型Rad18蛋白はRad6蛋白の発現量に依存してモノユビキチン化が促進されるのに対してZFD変異型ではモノユビキ・チン化がほとんど見られなくなること、RFD変異型は速やかに分解され、発現量が著しく減少することがわかった。また、Rad6結合部位(R6BD)を欠損したRad18は野生型細胞中ではモノユビキチン化されるのに対し、Rad18^<-/->マウス細胞中ではモノユビキチン化されない。一方、ZFD変異型Rad18は両細胞中でもモノユビキチン化されないことが明らかとなった。更に酵母でのTwo-hybrid法の解析からRad18蛋白はZFDで2量体を形成することも明らかとなった。これらの実験結果より以下のモデルを提唱した。Rad18はR6BDを介してRad6と結合する一方、ZFDを介して2量体を形成する。2量体中の一方のRad18はRad6と結合したもう一方のRad18によりモノユビキチン化される。更にこれら2種類のRad18蛋白質の細胞内局在を免疫染色法や生化学的方法を用いて解析した結果、モノユビキチン化されたRad18は主として細胞質に局在し、ユビキチン化をうけていない未修飾型Rad18は核内に局在することが明らかとなった。これらの実験結果は、過剰なRad18をモノユビキチン化することで核から排除し、核内のRad18の量を調節している可能性を示す。

Uv に よ り induced さ れ る ピ リ ミ ジ ン 2 quantity body は he と の damage more し て repair services rate が 悪 く, DNA replication の を resistance against す る こ と が い more. Rad18 は Rad6 と common し て stop parts で の PCNA を モ ノ ユ ビ キ チ ン change す る こ と で, injury 乗 り more え synthetic に masato and す る ポ リ メ ラ ー ゼ eta の induced に masato and す る こ と を shown し た. Rad18 protein <s:1> SDS-PAGEにお にお て て2 バ バ ドと て検 て検 て検 される される される 85 kd こ の う ち に quite す る molecular kind of 75 kd は に quite す る も う 1 this の molecular species が モ ノ ユ ビ キ チ ン change し た も の で あ る こ と を quality analysis に よ り Ming ら か に し た. Rad18 の モ ノ ユ ビ キ チ ン change institutions を interpret す る た め, intramolecular の RING フ ィ ン ガ ー areas (RFD) and び zinc フ ィ ン ガ ー areas (ZFD) に suddenly - different を import し, こ れ ら の - different Rad18 protein の モ ノ ユ ビ キ チ ン change を wild-type と compare beg し 検 た. Wild-type protein Rad18 は Rad6 protein の 発 now quantity に dependent し て モ ノ ユ ビ キ チ ン が promoting さ れ る の に し seaborne て ZFD - alien で は モ ノ ユ ビ キ · チ ン change が ほ と ん ど see ら れ な く な る こ と, RFD - alien は speed や か に decomposition さ れ, 発 now quantity が し く reduce す る こ と が わ か っ た. ま た, Rad6 combining site (R6BD) を owe loss し た Rad18 は wild-type cells で は モ ノ ユ ビ キ チ ン change さ れ る の に し, seaborne Rad18 ^ < - / - > マ ウ ス cells で は モ ノ ユ ビ キ チ ン change さ れ な い. In one side, the ZFD variant Rad18 <s:1> two cells, で モノユビキチ モノユビキチ is equalized by されな されな とが とが Ming ら となった となった. More に yeast で の Two - hybrid method の か ら Rad18 protein は ZFD で を 2 quantity body formation す る こ と も Ming ら か と な っ た. Youdaoplaceholder6 れら <s:1> experimental results よ the following モデ モデ を を を sing た た. Rad18 て R6BDを intercalates て てRad6と combines with する one side, and ZFDを intercalates <s:1> て2 volume を to form する. In the two volumes, the <s:1> Rad18 <s:1> Rad6と of the <s:1> side is combined with the <s:1> た <e:1> う う of the う side, and the <s:1> Rad18によ モノユビキチ is equalized される. More に こ れ ら 2 kinds の Rad18 bureau in を の cell immune protein staining や biochemistry method を use い て parsing し た results, モ ノ ユ ビ キ チ ン change さ れ た Rad18 は main と し て cytoplasm に bureau in し, ユ ビ キ チ ン change を う け て い な い undecorated type Rad18 は に bureau within the nucleus in す る こ と が Ming ら か と な っ た. こ れ ら の be 験 results は, turning な Rad18 を モ ノ ユ ビ キ チ ン change す る こ と で nuclear か ら exclude し, nuclear の Rad18 を の quantity adjustment し て い る possibility を す.

项目成果

Sonoda, E., et al.: "Multiple roles of Rev3, the catalytic subunit of polz in maintaining genome stability in vertebrate"The EMBO Journal. 22(12). 3188-3197 (2003)

Sonoda, E. 等人：“Rev3（polz 的催化亚基）在维持脊椎动物基因组稳定性方面的多重作用”EMBO 杂志。

Okada, T., et al.: "Involvement of verebrate Pol in Rad 18-dependent postreplication repair of UV damage"Journal of Biological Chemistry. 277(50). 48690-48695 (2002)

Okada, T. 等人：“脊椎动物 Pol 参与 Rad 18 依赖的紫外线损伤复制后修复”生物化学杂志。

Kishi, H.: "Osmotic shock induces G_1 arrest through p53 phosphorylation at Ser^<33> by activated p38^<MAPK> without phosphorylation at Ser^<15> and Ser^<20>"Journal of Biological Chemistry. 276(42). 39115-39122 (2001)

Kishi, H.：“渗透压休克通过活化的 p38^<MAPK> 在 Ser^<33> 处 p53 磷酸化诱导 G_1 停滞，而在 Ser^<15> 和 Ser^<20> 处没有磷酸化”《生物化学杂志》。

Nitta, M.: "Characterization and tumorigenicity of human ovarian surface epithelial cells immortalized by SV4O large T antigen"Gynecologic Oncology. 81(1). 10-17 (2001)

Nitta, M.：“SV4O 大 T 抗原永生化的人卵巢表面上皮细胞的特征和致瘤性”妇科肿瘤学。

立石 智, 山泉 克: "損傷トレランスとRAD6エピスタシス遺伝子群(Tolerance of DNA damage and RAD6 epistasis group)"蛋白質 核酸 酵素. 46(8). 1116-1123 (2001)

Satoshi Tateishi，Katsu Yamaizumi：“DNA 损伤的耐受性和 RAD6 上位基团”蛋白质核酸酶 46(8) 1116-1123 (2001)。