ヒト細胞における紫外線によるDNA損傷修復機構の解析

紫外线诱导人体细胞DNA损伤修复机制分析

• 批准号: 61015061
• 负责人: 山泉 克
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015061/
• 关键词: DNA修復; 色素性乾皮症; 皮フがん; 色素性乾皮症欠損タン白因子

HeLa細胞よりC群色素性乾皮症細胞に欠損しているDNA修復因子(C因子)の単離を試み、以下のような特長を明らかにすることができた。C因子は核に存在し、Kcl濃度を0.4M以上に上げないと溶出してこない。トリプシン処理で失活し、陽イオン交換体に結合することから、塩基性の核タン白であると考えられる。Sephacryl S-300によるゲル濾過により、その分子量は約55万であった。このC活性を有する分画には、A,F,G群のxp細胞を相補する活性は検出されなかったが、B群を相補する活性(B因子)が検出された。しかしこの分画を更にDNAセルロースで分画するとB因子とC因子は異なる分画に検出されることから、両者の間に強い相互作用は存在しないものと考えられる。次にC因子のC群xp細胞内での安定性をその残存活性量の測定から調べてみた。C活性は細胞質へ注射後約4時間で最高値に達し以下少くとも24時間内に活性の減少は認められなかった。また粗核抽出液の状態でC因子は極めて安定で4°Cで少くとも2ケ月は活性の減少は認められなかった。またC因子の細胞当りの総量は紫外線照射の前後で変化しないことから、前核細胞における修復因子のような誘導性のものではない。C活性はヒト以外の動物からも検出され、ウシ及びマウス細胞より調製した抽出液中のC因子のクロマト上での挙動、分子量共ヒト由来のC因子と同一で、C因子は種を越えてかなり共通した構造を持っていることが推定される。現在マウス腹水ガン細胞よりC因子の精製を試みており、陽イオン交換,ゲル濾過,DNAセルロース等のクロマトを組み合わせてその比活性を数百倍上げる段階まで精製を進めることが可能となったため、この標品を用いてDNA修復に関与すると考えられるいくつかの酵素活性の有無を調べている。

HeLa cells are deficient in DNA repair factor C (factor C), and the following characteristics are revealed. Factor C is present in the nucleus, Kcl concentration is above 0.4M, and the dissolution is above 0.4M. The process of inactivation and exchange of DNA was studied. Sephacryl S-300 has a molecular weight of about 550,000. The activity of group C and group B (factor B) was detected in the cells of group A, group F and group G. A strong interaction exists between the B factor and the C factor. Second, the stability and residual activity of factor C in C group xp cells were determined. C activity reached its highest value about 4 hours after cytoplasmic injection and decreased within 24 hours. The condition of the crude extract is stable at 4°C. The activity of the extract is reduced. The total amount of factor C in cells changed before and after ultraviolet irradiation, and the induction of repair factors in pronucleus cells changed. C activity in animals other than the C factor, the C factor in the extract, the C factor in the extract. The purification of factor C in ascitic fluid cells is now being tested for the presence or absence of enzyme activity in DNA repair by several hundred times the specific activity of the enzyme in DNA synthesis, protein exchange, filtration, and so on.

项目成果

Masaru Yamaizumi: Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 83. 1476-1479 (1986)

山泉胜：Proc.Natl.Acad.Sci.USA。