受精機構におけるユビキチン-プロテアソームシステム

受精机制中的泛素-蛋白酶体系统

• 批准号: 12146201
• 负责人: 横沢 英良
• 金额: $ 31.68万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12146201/
• 关键词: ユビキチン; プロテアソーム; 受精; 卵黄膜; 発生; ユビキチンレセプター

1.マボヤ卵黄膜蛋白質VC70のユビキチンリガーゼの探索:すでに、マボヤ精子放出液からVC70蛋白質をユビキチン化する分子量700kDaのユビキチン化酵素を単離し、さらに、そのユビキチン化活性を促進するユビキチンリガーゼE3様酵素を、ユビキチン化サイトLys234を含むVC70ペプチドを固定化したカラムを用いたクロマトグラフィーにより単離した。しかし、得られた蛋白質量が微量のために生化学的解析が不可能であったので、上記のVC70ペプチドをベイトに用いて酵母two-hybridスクリーニングを行い、2つのVC70ペプチド結合蛋白質を得た。一つは、UBAドメイン含有蛋白質で、これはVC70蛋白質が酵母内でユビキチン化され、そのポリユビキチン鎖を介して結合蛋白質として得られたと考えられる。一方、マボヤの近縁種であるカタユウレイボヤのESTデータベース検索の結果、もうひとつのクローンは全長ではなく、N末端配列を欠失したものであると推測される。この全長をクローニングし、VC70蛋白質のE3酵素である可能性や受精における役割を明らかにすることが今後の課題である。2.胚特異的ユビキチンレセプターの機能解析:アフリカツメガエルの胚特異的ユビキチンレセプターRpn10cが抗アポトーシス因子Scytheと特異的に結合する。Rpn10cとの結合に関与するScytheのN末端領域を解析し、それがタンデムに連結した4つのユビキチン様ドメインからなり、少なくとも2つのドメインの存在がRpn10cとの結合に必要であることを明らかにした。また、そのドメインがアポトーシス制御に必要であることを明らかにした。Rpn10cを含む胚特異的プロテアソームがScytheを介してどのように発生過程におけるアポトーシスを制御しているかを明らかにすることが今後の課題である。

1. マ ボ ヤ vitelline membrane protein VC70 の ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ の exploration: す で に, マ ボ ヤ sperm release liquid か ら VC70 protein を ユ ビ キ チ ン change す る molecular weight 700 kda の ユ ビ キ チ ン phenoloxidase を 単 し, さ ら に, そ の ユ ビ キ チ ン active を promoting す る ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ E3 others in enzyme を, ユ ビ キ チ ン change サ イ ト Lys234 を containing む VC70 ペ プ チ ド を immobilized し た カ ラ ム を with い た ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り 単 from し た. し か し, ら れ た protein quality が trace の た め に biochemical analytical が impossible で あ っ た の で, written の VC70 ペ プ チ ド を ベ イ ト に with い て yeast two hybrid - ス ク リ ー ニ ン グ を い rows, 2 つ の VC70 ペ プ チ ド binding protein を た. A つ は, UBA ド メ イ ン contains proteins で, こ れ は VC70 が yeast protein in で ユ ビ キ チ ン change さ れ, そ の ポ リ ユ ビ キ チ ン lock を interface し て binding protein と し て have ら れ た と exam え ら れ る. Side, マ ボ ヤ の about try species で あ る カ タ ユ ウ レ イ ボ ヤ の EST デ ー タ ベ ー ス 検 の results and も う ひ と つ の ク ロ ー ン は span で は な く, N terminal with column を owe lost し た も の で あ る と speculation さ れ る. こ の span を ク ロ ー ニ ン グ し の E3 VC70 protein and enzyme で あ る possibility や fertilization に お け る "を cut Ming ら か に す る こ と が の topics in future で あ る. 2. Embryo specific ユ ビ キ チ ン レ セ プ タ ー の function resolution: ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の embryo specific ユ ビ キ チ ン レ セ プ タ ー Rpn10c が resistance ア ポ ト ー シ ス factor Scythe と specific に combining す る. Rpn10c と の combining に masato and す る Scythe を の N terminal field analytical し, そ れ が タ ン デ ム に link し た 4 つ の ユ ビ キ チ ン others ド メ イ ン か ら な り, less な く と も 2 つ の ド メ イ ン の is が Rpn10c と の combining に necessary で あ る こ と を Ming ら か に し た. ま た, そ の ド メ イ ン が ア ポ ト ー シ ス suppression に necessary で あ る こ と を Ming ら か に し た. Rpn10c を containing む embryo specific プ ロ テ ア ソ ー ム が Scythe を interface し て ど の よ う に 発 birth process に お け る ア ポ ト ー シ ス を suppression し て い る か を Ming ら か に す る こ と が の subject in the future で あ る.

项目成果

ユビキチンシステムのメカニズム

泛素系统的机制

• 发表时间: 2004
• 期刊: 医学のあゆみ 211・1
• 作者: 佐伯 泰

Naoyuki Sakai: "Extracellular ubiquitin system implicated in fertilization of the ascidian, Halocynthia roretzi : Isolation and characterization."Developmental Biology. 264・1. 299-307 (2003)

Naoyuki Sakai：“与海鞘受精有关的细胞外泛素系统，Halocynthia roretzi：分离和表征。”发育生物学264・1（2003）。

Yayoi Kimura: "N-Terminal modifications of the 19S regulatory particle subunits of the yeast proteasome."Archives of Biochemistry and Biophysics. 409・2. 341-348 (2003)

木村弥生：“酵母蛋白酶体 19S 调节粒子亚基的 N 末端修饰”。生物化学和生物物理学档案 409・2（2003 年）。

Yuhsuke Kikukawa: "The 26S proteasome Rpn10 gene encoding splicing isoforms : Evolutional conservation of genomic organization in vertebrates"Biological Chemistry. 383. 1257-1261 (2002)

Yuhsuke Kikukawa：“编码剪接异构体的 26S 蛋白酶体 Rpn10 基因：脊椎动物基因组组织的进化保守”生物化学。

Hitoshi Sawada: "Extracellular ubiquitination and proteasome-mediated degradation of the ascidian sperm receptor"Proceedings of National Academy of Sciences, USA. 99・3. 1223-1228 (2002)

Hitoshi Sawada：“海鞘精子受体的细胞外泛素化和蛋白酶体介导的降解”，美国国家科学院院刊，99・3（2002）。