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受精機構におけるユビキチン-プロテアソームシステム

受精机制中的泛素-蛋白酶体系统

基本信息

批准号：
12146201
负责人：
横沢英良
金额：
$ 31.68万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.マボヤ卵黄膜蛋白質VC70のユビキチンリガーゼの探索:すでに、マボヤ精子放出液からVC70蛋白質をユビキチン化する分子量700kDaのユビキチン化酵素を単離し、さらに、そのユビキチン化活性を促進するユビキチンリガーゼE3様酵素を、ユビキチン化サイトLys234を含むVC70ペプチドを固定化したカラムを用いたクロマトグラフィーにより単離した。しかし、得られた蛋白質量が微量のために生化学的解析が不可能であったので、上記のVC70ペプチドをベイトに用いて酵母two-hybridスクリーニングを行い、2つのVC70ペプチド結合蛋白質を得た。一つは、UBAドメイン含有蛋白質で、これはVC70蛋白質が酵母内でユビキチン化され、そのポリユビキチン鎖を介して結合蛋白質として得られたと考えられる。一方、マボヤの近縁種であるカタユウレイボヤのESTデータベース検索の結果、もうひとつのクローンは全長ではなく、N末端配列を欠失したものであると推測される。この全長をクローニングし、VC70蛋白質のE3酵素である可能性や受精における役割を明らかにすることが今後の課題である。2.胚特異的ユビキチンレセプターの機能解析:アフリカツメガエルの胚特異的ユビキチンレセプターRpn10cが抗アポトーシス因子Scytheと特異的に結合する。Rpn10cとの結合に関与するScytheのN末端領域を解析し、それがタンデムに連結した4つのユビキチン様ドメインからなり、少なくとも2つのドメインの存在がRpn10cとの結合に必要であることを明らかにした。また、そのドメインがアポトーシス制御に必要であることを明らかにした。Rpn10cを含む胚特異的プロテアソームがScytheを介してどのように発生過程におけるアポトーシスを制御しているかを明らかにすることが今後の課題である。

1. Malva vitelline membrane protein VC70 のユビキチンリガーゼのExploration: すでに, Malva sperm ejaculation liquid からVC70 protein をユビキチンする molecular weight 700kDa のユビキチンchemical enzyme を単利し、さらに、そのユビキチンchemical activity promotion するユビキチンリガーゼE3様zymeを、ユビキチン化サイトLys 234をContains VC70 ペプチドをFixed したカラムを Use いたクロマトグラフィーにより単した.しかし、Get the protein quality が Trace amount のためにBiochemical analysis がimpossible であったので、Shangji VC70ペプチドをベIt uses two-hybrid yeast two-hybrid yeast and 2-hybrid VC70 ペプチド binding protein.一つは、UBAドメインcontains protein で、これはVC70 protein がYeast でユビキチン化され, そのポリユビキチン lock をsuke して binding protein として got られたと卡えられる. One side, マボヤのNearly縁kind of であるカタユウレイボヤのESTデータベース検SOのRESULT, もうひとつのクローンはFull-length ではなく, N-terminal arrangement を无码したものであると speculated される. The full length of このをクローニングし, VC70 protein のE3 enzyme である possibility や fertilization における丒明らかにすることが future project である. 2. Functional analysis of embryo-specific ユビキチンレセプターの: アフリカツメガエルのEmbryo-specific ユビキThe チンレセプターRpn10c has an anti-アポトーシス factor Scythe and a specific に-binding する. Rpn10cとの合に关与するScytheのNterminal domainをanalyticし、それがタンデムにConnectionした4つのユビキチン様ドメインからなり、小なくとも2つのドメインのexistent がRpn10cとの合に必であることを明らかにした.また、そのドメインがアポトーシスcontrol にNecessary であることを明らかにした. Rpn10cをcontains むEmbryo-specific プロテアソームがScytheを Introduction してどのように発生The process is as follows: the control of the process and the future projects.