ユビキチン化修飾を司る癌関運遺伝子の探索

寻找控制泛素化修饰的癌症相关基因

• 批准号: 14657575
• 负责人: 横沢 英良
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657575/
• 关键词: ユビキチン; 蛋白分解; 癌遺伝子; 癌抑制遺伝子; 細胞増殖抑制因子; ユビキチンリガーゼ; F-box蛋白質; 転写因子; 癌抑制因子; ユビキチン様蛋白質; SUMO-1

1.癌関連因子である細胞増殖抑制因子Tob/BTGファミリーがユビキチン化を受けて分解されることをすでに明らかにしている。そこで、そのユビキチン化修飾機構を明らかにするために、Tob/BTGファミリーに結合する蛋白質を酵母Two-hybridスクリーニングにより探索したが、期待する結果が得られなかった。2.細胞周期制御に関わる蛋白質のユビキチン依存的分解を司るユビキチンリガーゼE3として、G1/S期で機能するSCF複合体とG2/M期で機能するAPC/Cが存在する。Tob/BTGファミリーはS期進行を抑制することから、そのユビキチン化にSCF複合体が関与する可能性が考えられる。そこで、BTG1あるいはBTG2を、SCF複合体の構成サブユニットであるCul1(足場蛋白質)、Skp1(アダプター蛋白質)とともに、HeLa細胞に強制発現させ、免疫沈降とウエスタンブロッティングを行った。その結果、Cul1、Skp1のいずれもが、BTG1およびBTG2と共沈降することが明らかになった。3.次に、SCF複合体の基質認識サブユニットであるF-box蛋白質を各種用いて、BTG1あるいはBTG2との免疫沈降実験を行った。その結果、BTG1およびBTG2のいずれもが、2つのF-box蛋白質、Fwd1およびSkp2と結合することが明らかになった。4.そこで、2つのF-boxタンパク質の強制発現条件下で、BTG1のユビキチン化を解析したところ、Fwd1がBTG1のユビキチン化を顕著に促進し、Skp2は弱い促進効果しか示さなかった。以上の結果から、BTG1のユビキチン化はSCF^<Fwd1>複合体によって行われることが明らかになった。今後、BTGタンパク質のユビキチン化修飾の制御機構を解明することが必要である。

1. Cancer masato even factor で あ る cells raised colonization inhibitory factor Tob/BTG フ ァ ミ リ ー が ユ ビ キ チ ン change を by け て decomposition さ れ る こ と を す で に Ming ら か に し て い る. そ こ で, そ の ユ ビ キ チ ン chemical modified institutions を Ming ら か に す る た め に, Tob/BTG フ ァ ミ リ ー に combining す る protein を yeast Two - hybrid ス ク リ ー ニ ン グ に よ り explore し た が, expect す る results ら が れ な か っ た. 2. The cell cycle suppression に masato わ る protein の ユ ビ キ チ ン dependent decomposition を department る ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ E3 と し て, G1 / S phase で function す る SCF complex と G2 / M phase で function す る APC/C が exist す る. Tob/BTG フ ァ ミ リ ー は S period for を inhibit す る こ と か ら, そ の ユ ビ キ チ ン change に SCF complex が masato and す る possibility が exam え ら れ る. そ こ で, BTG1 あ る い は BTG2 を, SCF complex の サ ブ ユ ニ ッ ト で あ る Cul1 protein (foot), Skp1 (ア ダ プ タ ー protein) と と も に, HeLa に forced 発 now さ せ, immune sink と ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ を line っ た. そ の results, Cul1, Skp1 の い ず れ も が, BTG1 お よ び BTG2 と total sink す る こ と が Ming ら か に な っ た. 3 times に, SCF complex の matrix know サ ブ ユ ニ ッ ト で あ る F - box protein を various い て, BTG1 あ る い は BTG2 と の immune sink be 験 を line っ た. そ の results, BTG1 お よ び BTG2 の い ず れ も が, 2 つ の F - box protein, Fwd1 お よ び Skp2 と combining す る こ と が Ming ら か に な っ た. 4. そ こ で, 2 つ の F - box タ ン パ ク qualitative の forced で 発 now conditions, BTG1 の ユ ビ キ チ ン change を parsing し た と こ ろ, Fwd1 が BTG1 の ユ ビ キ チ ン change を 顕 に promote し, Skp2 は weak い promote unseen fruit し か shown さ な か っ た. Above results の か ら, BTG1 の ユ ビ キ チ ン change は SCF ^ < Fwd1 > complex に よ っ て line わ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. In the future, the BTGタ, <s:1>, パ, and the control body of the equinization modification of the equinization of the equinization ユビキチ will clarify that する, とが, and とが are necessary to である.

项目成果

Hitoshi Sasajima: "Antiproliferative proteins of the BTG/Tob family are degraded by the ubiquitin-proteasome system"European Journal of Biochemistry. 269. 3596-3604 (2002)

Hitoshi Sasajima：“BTG/Tob 家族的抗增殖蛋白被泛素蛋白酶体系统降解”《欧洲生物化学杂志》。

Koji Nakagawa: "PIAS3 induces SUMO-1 modification and transcriptional repression of IRF-1"FEBS Letters. 530. 204-208 (2002)

Koji Nakakawa：“PIAS3 诱导 SUMO-1 修饰和 IRF-1 转录抑制”FEBS Letters。