植物ウイルスの複製と細胞間移行の機能的統御に関する分子機構の解析

植物病毒复制和细胞间运动功能控制的分子机制分析

基本信息

批准号：
13039009
负责人：
飯哲夫
金额：
$ 3.46万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

1.トマトモザイクウイルス(ToMV)の弱毒株の解析から,複製酵素が転写後型ジーンサイレンシング(PTGS)のサプレッサーであることを予想していたが,アグロインフィルトレーションアッセイによりこれを証明した.また,サプレッサーの作用点がサイレンシングに伴い生じる21〜25塩基のsiRNA合成以降であり,かつ配列特異的なRNA分解酵素複合体の形成以前であることを突き止めた.2.タバコモザイクウイルスに感染したタバコが呈するモザイク症状の形成において,PTGSが如何に関与するかを解析した.その結果,葉がまだ極めて小さい時期(モザイク症状が目視できる以前)におけるウイルス分布が重要な要因と考えられた.その際,侵入したウイルスがサプレッサーの機能発現により感染を成立させられるか,あるいはウイルスにわずかに先行して成立するPTGS(すなわち抵抗性反応)により感染が阻止されるかの優劣が境界線を形成すると想像された.最初に形成される境界の一方がウイルス増殖域としてやがて淡黄部に,もう一方がウイルスフリーの濃緑部になることが考えられた.3.ToMVの感染性DNAをDEX誘導性のプロモーターに繋いだコンストラクトを導入したN.benthamianaを作出し解析した.この形質転換体では,DEX処理により数十%の細胞でToMV感染を誘導できた.感染植物由来の個々の感染細胞は,ウイルスの複製・増殖のステージという点で極めて不均一である.ToMV感染を同調的に誘導できる系の確立により,均質な感染細胞集団を得ることができる.この形質転換体は今後複製や細胞間移行のみならず,その他のウイルス感染過程の研究における様々な解析に有用となることが期待される.

1。我们预测，复制酶是通过分析番茄摩西病毒（TOMV）的分析转录后基因沉默（PTG）的抑制剂，但这是通过Agroinfiltration Assay证明的。我们还发现，抑制剂的作用点是在siRNA合成的21-25碱基之后，在沉默中发生，并且在序列特异性RNA降解酶复合物的形成之前。 2。我们分析了PTGS如何参与感染烟草病毒的烟草呈现的镶嵌症状。结果，人们认为在叶子仍然很小的时候（在视觉上可见镶嵌症状之前）病毒的分布是一个重要因素。目前，入侵病毒可以被抑制功能感染，也可以在病毒之前稍微先于病毒。可以想象，是否被PTG阻断感染（即电阻反应）之间的优势或自卑将形成边界线。最初形成的边界之一最终将成为病毒增殖区域的浅黄色部分，另一个将成为无病毒的深绿色部分。3。我们创建了和分析了本泰米亚省，该结构引入了一种将TOMV的传染性DNA与DEX诱导启动子联系起来的构造。在这种转化剂中，DEX治疗使TOMV感染得以诱导几十几个细胞。就病毒复制和增殖而言，受感染植物的单个感染细胞非常异质。通过建立可以交感诱导TOMV感染的系统，可以获得感染细胞的均匀种群。预计将来，这种转化剂不仅在复制和细胞间迁移中，而且在对其他病毒感染过程的研究中都有用。