ウイロイドRNAの生合成過程におけるプロセシング

类病毒RNA生物合成过程中的加工

基本信息

批准号：
60214007
负责人：
飯哲夫
金额：
$ 0.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウイロイドは裸の1本鎖環状RNAという特異な分子形態を持つ植物病原体で、宿主の酵素によって複製すると考えられている。しかしローリングサークル型の合成により、ウイロイド配列(十鎖)またはその相補鎖配列(一鎖)が2〜4単位タンデムにつながった中間体RNAを経るらしいことの他、ほとんど実験的な解明がなされていない。本研究では、ウイロイドの複製におけるプロセシング、すなわち十鎖多量体RNAより単位長ウイロイドが生成する過程を分子レベルで明らかにすることを目的とした。材料としてホップスタントウイロイド(HSV)を用いた。すでに我々はHSVの完全長cDNAを2単位以下タンデムに持つクローンに感染性のあることを見出していたが、このcDNAクローンの感染性とウイロイドのプロセシングとの間に相関のあることを明らかにできた。つまり、cDNAクローンがウイロイドRNAのプロセシングに必須の領域を2回以上持っていれば、cDNAクローンに感染性が見出された。次に、1単位以上2単位以下のHSVcDNA配列を持つクローンを多数作成し、それらを用いた感染実験からcDNAクローンの感染性、つまり、ウイロイドのプロセシングに必要な65ヌクレオチドより成る領域(regionAと名付けた)を限定した。この領域は、現在までに塩基配列の知られているウイロイドの間でよく保存されていた。また、regionAでは安定な2次構造を組ませることができた。プロセシング酵素はこの構造を認識し多量体十鎖RNAを特異的に切断し、単位長ウイロイドを生成すると考えられた。この仮説を実証する為、regionAに人為的に点突然変異が導入された変異ウイロイドを多数作製した。

病毒体是具有独特的分子形态的植物病原体，称为裸链圆形RNA，被认为可以通过宿主酶复制。然而，除了滚动圆类型的合成似乎会导致病毒序列（千股）或其互补链（一条链）经过导致2-4个单位串联的中间RNA，几乎没有实验性的实验性实验性。这项研究旨在阐明病毒复制中的加工，即，在分子水平的点链多聚体RNA中产生单位长度的病毒型的过程。霍普特技病毒（HSV）用作材料。我们已经发现，具有HSV的串联全长cDNA的克隆具有感染性，但是我们已经能够揭示该cDNA克隆的感染性与病毒式处理之间存在相关性。换句话说，如果cDNA克隆多次具有处理病毒RNA必不可少的区域，则发现cDNA克隆是传染性的。接下来，创建了许多具有1个或更多单位和2个单位的HSV cDNA序列的克隆，并使用使用这些单位的感染实验来限制cDNA克隆的感染性，即由65个核苷酸（命名区域A）的区域进行处理。该区域在已知的基本序列已知的病毒体中得到了很好的保守。此外，区域能够创建稳定的二级结构。人们认为，加工酶识别这种结构，并特别裂解多聚体0链RNA，产生单位长度的病毒型。为了证明这一假设，我们创建了大量已人为地引入地区的突变体病毒。