原形質連絡の構成成分の検索と新たな機能解析系の開発

胞间连丝成分的寻找及新功能分析系统的开发

基本信息

批准号：
11874118
负责人：
飯哲夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11874118/
关键词：
原形質連絡細胞間移行植物ウイルス移行タンパク

项目摘要

パーティクルガン法により未知のタンパクと細胞質局在のGFPを植物表皮細胞で共発現させ、1日後のGFP拡がりを検出することにより、未知のタンパクの原形質連絡の透過性を上昇させる能力を評価しうることを明らかにした。従来からその能力の知られていたタバコモザイクウイルス(TMV)の30Kタンパク、トウモロコシのKN1などは、約50-60%の導入部位でGFPの拡散を誘導した。ジャガイモXウイルス(PVX)のコードするタンパクについて調べた結果、12Kタンパクに原形質連絡の排除分子量限界を上昇させる能力のあることが分かった。この手法は、従来のマイクロインジェクション法に比べ、より信頼性が高く且つ簡便であり、応用性も高い。感染性DNAを用いた相補実験の結果から、PVXの細胞間移行には3種の移行タンパクのうち25Kタンパク、12Kタンパクの発現は必須であるが、8Kタンパクは12Kタンパクの機能を補助するものであり、その発現は必要不可欠ではないことが分かった。また、PVXの細胞間移行が膜小胞あるいは細胞膜を介す可能性が考えられた。これは従来の考えからは除外されているものである。さらに、PVXの場合も、TMVと同様、複製と移行の間には何らかの関連があると予想された。ところが、キュウリモザイクウイルスのコードする細胞間移行機能は、TMVとPVXの移行能欠損変異株の細胞間移行をともに相補することができた。この結果は、これらの異なる移行タンパクの機能の比較的解析が今後の研究において重要であることを意味する。

通过通过粒子枪法中的植物表皮细胞中的细胞质局部GFP共表达未知蛋白，并在1天后检测GFP扩散，可以评估它可以评估增加未知蛋白对等离子体通信的渗透性的能力。以前以其能力而闻名的烟草病毒（TMV）的30K蛋白质和KN1诱导了GFP的扩散，约占引入部位的50-60％。在研究了由马铃薯X病毒（PVX）编码的蛋白质后，发现12K蛋白具有增加血浆通信排除的分子量极限的能力。该方法比常规的微注射方法更可靠，简单且高度适用。使用感染性DNA互补实验的结果表明，三种过渡蛋白中25K和12K蛋白的表达对于PVX的细胞间迁移至关重要，但是8K蛋白有助于12K蛋白的功能，这不是必不可少的。还认为PVX的细胞间易位可能是通过膜囊泡或细胞膜。这被排除在传统思想之外。此外，在PVX的情况下，与TMV一样，可以预期复制与迁移之间会有一定的联系。但是，由黄瓜镶嵌病毒编码的细胞间易位功能能够补充缺乏TMV和PVX能力的突变菌株的细胞间易位。该结果意味着对这些不同过渡蛋白功能的相对分析在未来的研究中很重要。