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RNAiを用いたショウジョウバエ変異体ライブラリーの構築

利用 RNAi 构建果蝇突变体文库

基本信息

批准号：
14011206
负责人：
西郷薫
金额：
$ 4.48万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成14年度は以下の結果を得た。1)ゲノム・アノテーションのアップデートにより、半数ほどの遺伝子で予測配列が更新された。これに伴って至適なプライマー配列をコンピューターにより再計算し、11000遺伝子についてプライマーを揃えることができた。2)ESTクローンのない遺伝子についてcDNAプールよりIR-cDNA構築を行う条件設定を行った。機械を導入した高速化によって、現在までに5,500の遺伝子についてIR-cDNAを得た。このうち3,200遺伝子についてはショウジョウバエに導入し、7,000系統を越える変異体を樹立した。3)これらの系統をAct-GAL4ハエ系統と交配することにより全細胞でRNAiを誘導し、成虫までの発生過程で致死となる遺伝子をスクリーンした。作成した全ての系統で致死となる遺伝子は1617遺伝子(5232系統)中、594遺伝子、また全系統が生存した遺伝子は554遺伝子であった。残りのおよそ1/3の遺伝子では致死と生存の表現型を示す系統が混在していた。このことは、導入した遺伝子の発現に及ぼす染色体位置効果がそれほど極端に影響するわけではないこと、RNAiが非特異的に発生を阻害するわけではないこと、ゲノムにおける致死遺伝子の割合はこれまで推定されていた30%よりも高いことを示唆している。4)局所的にGAL4を発現する幾つかのGAL4ハエ系統を用い、付属肢、複眼に異常を示す変異体系統をスクリーンしたところ、それぞれ10%程度の変異体で異常表現型が観察された。すなわち、このRNAi変異体系統が形態形成に関与する遺伝子のゲノム網羅的なスクリーンに適用可能であることが判明した。

The following results were obtained in the year of Heisei 14. 1) The list of pre-test assignments for half of the test entries is updated. This is the first time I've ever been to a school. 2) ESTs are selected for cDNA selection and IR-cDNA construction. Mechanical introduction of high-speed technology, now 5,500 genes in IR-cDNA acquisition The 3,200-bit system was introduced, and the 7,000-bit system was installed. 3) Act-GAL4: Act-Gal4: Act-Gal 4: Act- Create a complete system of death, death. 1/3 of the remaining genes are mixed with the phenotype of death and survival. The gene expression and chromosome position of this gene are extremely affected by RNAi, and the gene expression of this gene is extremely inhibited by RNAi, which is not specific. 4)GAL4 is a rare, unusual, and unusual phenotype that can be detected in a variety of ways. The relationship between morphogenesis and genetic diversity of RNAi heterosystems may be identified.