DNA修復酵素を用いた突然変異特異的クローニング法の確立

点击翻译按钮获取中文摘要

1)Microsatellite Instability(MSI)陽性大腸癌の突然変異特異的クローニング法による解析Microsatelite instability陽性大腸癌のうち、40%以上のmicrosatelliteでinstabilityのある病変(MSI-H)よりstrand-switch法を用いてcDNA libraryを作成する。隣接する正常組織より同様にcDNA libraryを作成した。これらをhybridizeさせ、A/Gミスマッチ特異的glycosylaseである大腸菌MutY、またはT/Gミスマッチ特異的glycosylaseであるhuman Thymine-DNA glycosylase(hTDG)を作用させ、さらにEDTA存在下でChitin binding domainをN末端に融合させたhuman AP endonuclase 1(hAPE1)を結合させ、Chitin beadsでpull-downした。Pull-downしたDNAをvectorにligationさせ大腸菌に導入しクローン化した。2次スクリーニングを行い、陽性cloneをsequenceし現在解析中である。2)大腸癌肝臓転移転移病巣における突然変異特異的クローニング法による解析転移特異的な、遺伝子の突然変異があるかどうかを、大腸癌の転移巣と原発巣を用い、上記1)の方法で現在解析中である。