DNA修復酵素を用いた突然変異特異的クローニング法の確立

利用DNA修复酶建立突变特异性克隆方法

• 批准号: 15012243
• 负责人: 塚本 俊彦
• 金额: $ 4.29万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012243/
• 关键词: 大腸癌; 突然変異; RNA editing

1)Microsatellite Instability(MSI)陽性大腸癌の突然変異特異的クローニング法による解析Microsatellite instability陽性大腸癌のうち、40%以上のmicrosatelliteでinstabilityのある病変(MSI-H)よりstrand-switch法を用いてcDNA libraryを作成し,隣接する正常組織より同様にcDNA libraryを作成した.これらをハイブリダイズさせ、大腸菌MutS組換えタンパク質とこれに対する抗体を用いてpull downした.Pull downしたDNAをvectorにligationし、Tumor/NormalとコントロールとしてNormal/Normalのプローブを作成し、differential hybridizationによりスクリーニングを行い、陽性クローンを解析した.その結果,CEA遺伝子,LgalS3遺伝子,CCNI遺伝子の塩基配列の置換を検出するとともに,あらたな,Natural antisense遺伝子を検出することができた.これは,RNA editingによる塩基置換によるものと推定され,現在もとのサンプルからのgenomic DNAとcDNAの両方の解析をすすめている.

1) Microsatellite Instability (MSI) malignant tumor is characterized by sudden changes in the diagnosis of Microsatellite instability, more than 40% of the microsatellite's instability disease (MSI-H), the strand-switch method is made with the cDNA library, and the normal tissue is made with the same cDNA library. The antibodies were detected by pull down, DNA, vector, Tumor/, differential hybridization, differential hybridization, ligation, differential hybridization, and so on. The results show that CEA spools, LgalS3 spools, CCNI spools, and Natural antisense spools are not available in the column configuration. The RNA editing is based on a presumption of error, and now it is necessary to analyze the cDNA of the genomic DNA.