DNA修復酵素を用いた突然変異特異的クローニング法の確立

利用DNA修复酶建立突变特异性克隆方法

• 批准号: 16012257
• 负责人: 塚本 俊彦
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16012257/
• 关键词: 大腸癌; 突然変異

1.研究の目的と進め方塩基配列の差異をもとに網羅的に遺伝子をcloningすることが可能ならば、これを、病変と正常組織で行えばsomatic mutationが、また個体間で行えばポリモルフィズムを、発見、解析する強力な手法となり得ることが予測される。このような、"突然変異特異的クローニング法"の確立と、そのhigh-throughputな系への移行を目的として研究を行ってきた。まず、系の確立のために、塩基配列の変化が多いと予想される、DNA修復酵素の異常によるMicrosatellite Instability(MSI)陽性大腸癌を用いて、その正常組織と癌組織より作成したcDNA libraryをハイブリダイズさせ、heteroduplexを特異的に認識するDNA修復酵素を用いてpull downし、得られたクローンを解析した。2.過去一年の成果得られたクローン、用いたサンプルのcDNA、染色体DNAを解析した結果、3'UTRのmononucleotide repeatの変異を持つ複数の遺伝子と、coding領域に変異の存在する小数の遺伝子を単離することができた。さらにこの方法により、癌組織においてのみ、高率に塩基配列の変異が認められる新規遺伝子をクローニングすることができた。これは、癌細胞の増殖に関与することが知られている遺伝子のnatural antisense transcript(NAT)である可能性が高く、癌細胞における発現量と配列の変化を含め、現在publicationにむけて実験を進めている。

1. The purpose of this study is to investigate the genetic variation in the distribution of DNA and DNA, and to identify and analyze the genetic variation in the distribution of DNA and DNA. The establishment and study of the "sudden and special" high-throughput method DNA repair enzymes were pulled down and analyzed in the presence of DNA repair enzymes, which were identified by DNA sequencing, Microsatellite Instability(MSI), positive colorectal cancer, and heteroduplex in normal tissues and cancer tissues. 2. The results of the past year have been obtained from the analysis of cDNA, chromosome DNA, 3'UTR monucleotide repeat, multiple genes, coding domain, and small number of genes. This method is based on the identification of new genes in cancer tissues and the high rate of gene alignment. The probability of cancer cell proliferation is high, the amount of cancer cell detection is high, and the alignment is high.