細胞膜ラフト領域局在化シグナルの解明

质膜筏区域定位信号的阐明

• 批准号: 14014227
• 负责人: 前川 昌平
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14014227/
• 关键词: 細胞膜; ラフト; コレステロール; 神経; 脳; カルシウム; 極性; シナプス

1.中枢神経細胞のラフト画分の主要タンパク質であるNAP-22の脂質結合について解析し、これがフォスファチジルコリンとコレステロールを含むリポソームの膜中にコレステロールの微小集合領域を形成する機能を持つことを見い出した。この機能部位を同定するためにタンパク質をC端より欠損させた変異体を構築し、N末端の60アミノ酸配列とN末へのミリスチル酸付加が重要であることを同定した。さらにコレステロールと同様に小さな極性基を持つフォスファチジルエタノールアミンも同様に挙動することを見い出した。培養細胞での発現系ではNAP-22の局在とフォスファチジルエタノールアミン、コレステロールの共局在を見い出した。さらにTPAによるC-キナーゼの活性化によりNAP-22がラフトより解離することを観察した。2.脳由来のラフト構成因子としてサイクリックヌクレオチドファスフォジエステラーゼ2を新たに見い出した。更にクロライドポンプがラフトに局在し、NAP-22を含むラフトと局在を同じくすることを発見した。また神経細胞様の培養細胞よりラフト存在因子としてストマチン2、letm1、KIAA0085等を見い出した。3.グリア細胞由来のミエリン膜構築因子の内、CNPase、PLP、MOG等のラフト局在を見い出した。4.ラフト構築因子の相互作用解析にBlue-Native PAGEが有効であることを見い出し、神経細胞、ミエリン膜由来のラフト構築因子の相互作用を解析しつつある。5.カルシウムシグナルに関わるニューロカルシンやアネキシン6がNAP-22と結合することでラフトに局在することを見い出した。この知見はNAP-22を足場とするカルシウムシグナル機構の存在を示唆している。

1. The function of NAP-22 in lipid binding, analysis and formation of micro-aggregate domains in the membrane of central neurons The functional position is the same as that of the C terminal, the N terminal and the N terminal. The first step is to create a new environment for the community. The development of culture cells is in the process of developing NAP-22 cells. The NAP-22 was activated by the TPA. 2. The origin and composition factors are different from each other. In addition, NAP-22 has been developed in the same way. The presence of factors such as letter2, letterm1, and KIAA0085 in cultured cells of human brain cells was also observed. 3. The origin of cell membrane construction factors, such as CNase, PLP, MOG, etc. 4. Analysis of the interaction between the building factors of the brain cells and the membrane by Blue-Native PAGE 5. The NAP-22 is a combination of the following: This information indicates that NAP-22 is fully operational.

项目成果

宮田清司: "Biochemical and ultrastructual analyses of IgLON cell adhesion molecules, Kilon and OBCAM, in the rat brain"Neuroscience. (In press). (2003)

Kiyoshi Miyata：“大鼠大脑中 IgLON 细胞粘附分子 Kilon 和 OBCAM 的生化和超微结构分析”神经科学（2003 年出版）。

松永 渉: "Expression of high levels of tubulin and mirotubule associated protein 2d in the neurohypophysial astrocytes of adult rat"Neuroscience. 111. 151-162 (2002)

Wataru Matsunaga：“成年大鼠神经垂体星形胶质细胞中高水平微管蛋白和微管相关蛋白 2d 的表达”神经科学。 111. 151-162 (2002)

前川 昌平: "Molecular characterization of the detergent-insoluble cholesterol-rich membrane microdomain(raft) of the central nervous system"Biophys.Biochim.Acta. (In press). (2003)

Shohei Maekawa：“中枢神经系统的去污剂不溶性富含胆固醇的膜微域（筏）的分子特征”Biophys.Biochim.Acta（出版中）。

寺下 彰: "Lipid binding activity of a neuron-specific protein NAP-22 studied in Vivo and in Vitro"J.Neuroscience Research. 70. 172-179 (2002)

Akira Terashita：“体内和体外研究的神经元特异性蛋白 NAP-22 的脂质结合活性”J.Neuroscience Research。70. 172-179 (2002)。

農山 健次朗: "Localization of cyclic nucleotide phosphodiesterase 2 in the brain-derived Triton-insoluble low-density fraction(raft)"Neuroscience Research. 45. 141-148 (2003)

Kenjiro Noyama：“环核苷酸磷酸二酯酶 2 在脑源性 Triton 不溶性低密度组分（筏）中的定位”神经科学研究 45. 141-148 (2003)。