核内オーファンプロテインネットワークの解明

核孤儿蛋白网络的阐明

• 批准号: 14014235
• 负责人: 田代 聡
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14014235/
• 关键词: 核高次構造; 核機能可視化; ICD領域

1)GFP-RAD51融合タンパク質の過剰発現により可視化された領域は、ICD領域の一部であり、さらに遺伝子転写部位と密接な関連があることが明らかになった。さらに、特定の条件下でGFP-RAD51融合蛋白質が形成するフィラメントが破壊されることが明らかになったため、現在GFP-RAD51と結合し複合体を形成している蛋白質の解析を行っている。2)ゲノム修復蛋白質動態の解析をより効率的に行うため、市販されている紫外線レーザーを装備した共焦点レーザー顕微鏡を用いて紫外線マイクロ照射法を新たに確立したので報告した。3)間期核における染色邸領域配置を解析するための三次元マルチカラーFISH法を確立した。これと関連して、ヒト細胞において染色体の複製標識法を用いることにより、個々の染色体領域は細胞分裂時に再配置されることを明らかにしたので報告した。3)転写抑制因子Bach2と転写部位の関連の検討を行った。その結果、酸化ストレス誘導後、SUMO化されたBach2が形成する核内フォーカスがPML bodyと位置的に密接な関連を示し、さらにPML body内の遺伝子転写が特異的に抑制されることを明らかにした。現在論文投稿中である。現在、Bach2フォーカスに共局在する蛋白質の解析と、リンパ球での内因性Bach2の局在の解析とを進めている。特定の転写因子による遺伝子発現調節と核高次構造の関連を明らかにした報告は国内外になく、ポストゲノムにおける核高次構造研究の重要性を示すことができたと考えられる。

1）通过GFP-RAD51融合蛋白的过表达可视化的区域是ICD区域的一部分，进一步发现与基因转录位点密切相关。此外，已经揭示了GFP-RAD51融合蛋白形成的丝在某些条件下被破坏，因此，目前正在进行与GFP-RAD51结合并形成复合物的蛋白质的分析。 2）为了更有效地分析基因组修复蛋白动力学，我们报告说，使用配备有市售紫外线激光器的共聚焦激光显微镜建立了一种新的紫外线微辐照方法。 3）已经建立了三维多色鱼方法，以分析染色区域在相间核中的放置。在这种情况下，我们报告说，通过在人类细胞中使用染色体复制标记方法，单个染色体区域将在细胞分裂时重新定位。 3）我们研究了转录阻遏物Bach2与转录部位之间的关系。结果，揭示了氧化应激诱导后由sumoyper的Bach2形成的核焦点与PML体密切相关，并且PML体内的基因转录受到了特别抑制。目前提交论文。目前，我们正在对Bach2焦点共定位的蛋白质进行分析，并分析内源性Bach2在淋巴细胞中的定位。在日本或国外，没有任何报道揭示了特定转录因子和核结构的基因表达调节之间的关系，并且人们认为对核结构的核结构研究能够证明核结构研究的重要性。

项目成果

Hoshino, H: "Expression of the oxidative stress-regulated transcription factor Bach2 in differentiating neuronal cells"J. Blochem.. 132. 427-431 (2002)

Hoshino，H：“氧化应激调节转录因子 Bach2 在分化神经元细胞中的表达”J。

Katsuoka, F.: "Small Maf compound mutants display central nervous system neuronal degeneration, aberrant transcription, and Bach protein mislocalization coindcident with mvoclonus and abnormal startle response"Mol Cell Biol.. 23. 1163-1174 (2003)

Katsuoka, F.：“小 Maf 复合突变体表现出中枢神经系统神经元变性、异常转录和巴赫蛋白错误定位，与 mvocalonus 和异常惊吓反应同时发生”Mol Cell Biol.. 23. 1163-1174 (2003)

Walter J: "A new system for laser-UVA-microirradiation of living cells"J Mlcrosc. 209. 71-75 (2003)

Walter J：“活细胞激光-UVA-微照射的新系统”J Mlcrosc。