急性前骨髄球性白血病における15;17染色体転座形成分子機構の研究

急性早幼粒细胞白血病15;17染色体易位形成的分子机制研究

• 批准号: 08770564
• 负责人: 田代 聡
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770564/
• 关键词: ERR; 急性前骨髄球性白血病; 15;17転座; Rad51

1)ゲルシフト法を用いたDNA結合蛋白質の解析放射線照射、紫外線照射およびVP-16、メソトレキセート、サイクロフォスファミド、ビンクリスチンを添加培養を行ったNIH3T3細胞株、各種白血病細胞株、マウス肉腫細胞株より核抽出液を調製し、ERRを含むDNA断片をDNAプローブとして用いゲルシフト法にてDNA結合蛋白質の発現量を検討した。その結果、NIH3T3細胞および一部の白血病細胞株については紫外線照射によりDNA結合蛋白質の発現量が増加傾向を示していることが明らかとなった。2)遺伝子組換えレポータープラスミッドを用いた相同組換えの検出放射線照射、紫外線照射およびVP-16、メソトレキセート、サイクロフォスファミド、ビンクリスチンを添加培養を行ったマウス肉腫細胞株およびNIH3T3細胞株に対してERR相同組換えレポータープラスミッドをトランスフェクション法により遺伝子導入を行った。明らかな相同組換え頻度の増加は全ての実験において認められなかった。3)Rad51蛋白質の発現パターンについてERR結合蛋白質の一部に遺伝子組換え関連蛋白質が含まれていると考え、その代表であるRad51蛋白質についてゲルシフト法を用いてERR結合蛋白質のスーパーシフトを検討した。その結果、Rad51蛋白質がERR結合蛋白質の一部である可能性が示唆された。また、Rad51蛋白質のヒトリンパ球での発現および分布パターンについて解析した結果、Rad51蛋白質はS期に特異的に核内フォーカスを形成していることが明らかとなった。

1) Analysis of DNA-binding proteins using gel shift Nuclear extracts were prepared from NIH3T3 cell lines, various leukemia cell lines, and mouse sarcoma cell lines, which were cultured with radiation irradiation, ultraviolet irradiation, and VP-16, methotrexate, cyclophosphamide, and vincristine, and the expression level of DNA-binding proteins was examined using a DNA fragment containing ERR as a DNA探针。结果，揭示了当NIH3T3细胞和某些白血病细胞系被紫外线照射时，DNA结合蛋白的表达水平倾向于增加。 2）使用遗传重组的报道质粒检测同源重组。错误同源重组报道质粒使用用于小鼠肉瘤细胞系和NIH3T3细胞系的转染方法转染，这些方法是用辐射，紫外线照射和VP-16，VP-16，甲基甲基化的，cyclecrecrine和cloplopline的NIH3T3细胞系进行的，这些细胞均与辐射，紫外线照射和vp-16，cyclopline clopsine cyclopsine和cloplopsine cyclopsine clossine clossine。在所有实验中均未观察到同源重组频率的明显增加。 3）关于RAD51蛋白的表达模式，我们认为错误结合蛋白的一部分含有遗传重组蛋白，并且使用RAD51蛋白的凝胶移位方法研究了错误结合蛋白的Suppershift，这是一个代表性的例子。结果表明Rad51蛋白可能是错误结合蛋白的一部分。此外，对人淋巴细胞中RAD51蛋白的表达和分布模式的分析表明，RAD51蛋白在S相中特异性地形成了核内焦点。

项目成果

Satoshi Tashiro: "S phase specific formation of the human Rad51 protein nuclear foci in lymphocytes" Oncogene. 12・6. 2165-2170 (1996)

Satoshi Tashiro：“淋巴细胞中人 Rad51 蛋白核灶的 S 期特异性形成”Oncogene 12・6（1996）。