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Bcl-xLによる小胞体ストレス誘導性アポトーシスの制御機構の解明

阐明Bcl-xL内质网应激诱导细胞凋亡的控制机制

基本信息

批准号：
14028026
负责人：
中川敏幸
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028026/
关键词：
小胞体ストレス Bcl-xL アポトーシス細胞内小器官ミトコンドリア

项目摘要

【目的】小胞体から核や細胞質へ発信されるシグナルは、小胞体内で折り畳み異常を起こした蛋白質の蓄積("小胞体ストレス")が誘因となる。しかし、このシグナルへのBcl-2ファミリーの関与は不明である。本研究は、Bcl-xLの小胞体ストレスによるアポトーシスの制御機構の解明を目的にしている。【研究実績】1.小胞体に局在するBcl-xLの構築。小胞体に局在するcytochrome b5とBcl-xLの膜貫通部を入れ替えた変異型Bcl-xLを構築した。さらに、内在性Bc1-xLと区別するため、C末端部にFlagを付加し、293T細胞に導入後、ウェスタンブロットおよび抗Flag抗体での染色にてキメラ蛋白質(変異型Bcl-xL)を確認した。2.変異型Bcl-xLレトロウイルスの構築およびPC12細胞に感染による形質転換細胞の樹立。変異型Bcl-xLをpBabe Puroレトロウイルスベクターにクローニング後、パッケージング細胞株(293GPG)にてウイルスを作成した。ウイルス(変異型Bcl-xLレトロウイルスおよびコントロールとしてpBabe Puroベクターレトロウイルス)をPCl2細胞に感染させ形質転換細胞を樹立した。3.以上の細胞を使用し、各種刺激によるアポトーシスヘの影響、小胞体ストレス応答への関連を検討する。さらに、細胞内器官とアポトーシスおよび癌化との関連を明らかにするために、Bcl-xLの細胞内局在の変化による細胞増殖への影響、小胞体ストレス後の細胞形態変化、またミトコンドリアからのアポトーシスシグナルヘの影響を探りながら検討する。

[objective] small cell bodies, small nuclei, small cells, nuclei, nuclei, nuclei, Please tell me the difference between Bcl-2 and unknown. In this study, the Bcl-xL microsomal system was used to clarify the purpose of the control mechanism. [research report] 1. The small cell body is located in the Bcl-xL body. The small cell bodies were inserted into the general part of the membrane of cytochrome b5 'Bcl-xL'. The Bcl-xL cells of the small cell bodies were replaced by the small cell bodies. Anti-Bc1-xL, endogenous Bcl-xL, C-terminal Flag, 293T cell, anti-DNA antibody, anti-DNA antibody staining, anti-DNA antibody staining and DNA sequencing. two。 Type A Bcl-xL