权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Bcl-xLによる小胞体ストレス誘導性アポトーシスの制御機構の解明

阐明Bcl-xL内质网应激诱导细胞凋亡的控制机制

基本信息

批准号：
14028026
负责人：
中川敏幸
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028026/
关键词：
小胞体ストレス Bcl-xL アポトーシス細胞内小器官ミトコンドリア

项目摘要

【目的】小胞体から核や細胞質へ発信されるシグナルは、小胞体内で折り畳み異常を起こした蛋白質の蓄積("小胞体ストレス")が誘因となる。しかし、このシグナルへのBcl-2ファミリーの関与は不明である。本研究は、Bcl-xLの小胞体ストレスによるアポトーシスの制御機構の解明を目的にしている。【研究実績】1.小胞体に局在するBcl-xLの構築。小胞体に局在するcytochrome b5とBcl-xLの膜貫通部を入れ替えた変異型Bcl-xLを構築した。さらに、内在性Bc1-xLと区別するため、C末端部にFlagを付加し、293T細胞に導入後、ウェスタンブロットおよび抗Flag抗体での染色にてキメラ蛋白質(変異型Bcl-xL)を確認した。2.変異型Bcl-xLレトロウイルスの構築およびPC12細胞に感染による形質転換細胞の樹立。変異型Bcl-xLをpBabe Puroレトロウイルスベクターにクローニング後、パッケージング細胞株(293GPG)にてウイルスを作成した。ウイルス(変異型Bcl-xLレトロウイルスおよびコントロールとしてpBabe Puroベクターレトロウイルス)をPCl2細胞に感染させ形質転換細胞を樹立した。3.以上の細胞を使用し、各種刺激によるアポトーシスヘの影響、小胞体ストレス応答への関連を検討する。さらに、細胞内器官とアポトーシスおよび癌化との関連を明らかにするために、Bcl-xLの細胞内局在の変化による細胞増殖への影響、小胞体ストレス後の細胞形態変化、またミトコンドリアからのアポトーシスシグナルヘの影響を探りながら検討する。

[Objective] The accumulation of protein in the cytoplasm and nucleus of small cells ("small cells") is the cause of abnormal protein accumulation in small cells In addition, the Bcl-2 gene expression is related to the gene expression. This study aims to clarify the regulatory mechanism of Bcl-xL microcellular transformation. 1. Construction of microcellular structure in Bcl-xL. The membrane penetration part of the cytochrome b5 and Bcl-xL in the cell structure is replaced by the heterogeneous Bcl-xL structure. After introduction of 293T cells, the intrinsic Bc1-xL protein (variant Bcl-xL) was confirmed by staining with anti-Flag antibody. 2. Construction of heteromorphic Bcl-xL cells and establishment of morphologically altered cells infected with PC12 cells. Different types of Bcl-xL can be found in different cell lines (293GPG). PC12 cells were infected with Bcl-xL and transformed cells were established. 3. The effects of the above stimuli on cell growth and development are discussed. This paper discusses the relationship between intracellular organ dysfunction and carcinogenesis, the effect of Bcl-xL intracellular localization on cell proliferation, the change of cell morphology after microcellular dysfunction, and the effect of intracellular dysfunction.