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RNAiを用いたショウジョウバエATF-2のアポトーシスへの機能解析

使用 RNAi 分析果蝇 ATF-2 对细胞凋亡的功能

基本信息

批准号：
14028066
负责人：
秋丸裕司
金额：
$ 2.56万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028066/
关键词：
ショウジョウバエ JNK ATF-2 p38 MEKK RNAi

项目摘要

物理化学的ストレス(放射線、紫外線、抗ガン剤)やサイトカイン(TNFa、Fas ligand)は、JNK (c-Jun N-terminal kinase)やp38のSAPK (stress-activated protein kinase)カスケードにより活性化されるCRE (cAMP response element)結合因子CREB/ATFファミリーの一つATF-2のショウジョウバエホモローダdATF-2の機能を明らかにするため、胚にdATF-2のdsRNAをインジェクションしてdATF-2の機能を調べた。ショウジョウバエJNKは胚発生期のdorsal closure(背部閉塞)という現象にJunのリン酸化を介して機能している。dATF-2とdJunのRNAiを行って、dorsal closureの異常が観察されるかどうか調べたところ、dJunのRNAiはdorsal closure defectが見られたが、dATF-2の場合はdorsal closureに異常は認められなかった。物理化学的ストレスによってdATF-2が活性化されることをin vivoで明らかにするため、3令幼虫に0.1M NaClをインジェクションする方法でosmotic stressを与え、dATF-2のリン酸化がp38カスケードによって亢進するかどうかをWestern blottingにより調べた。NaClインジェクション後、幼虫のextractを抗MEKK及びp38リン酸化抗体でWestern blottingを行うと、MEKK、p38 kinaseのリン酸化が認められたことから、NaClによる幼虫のosmotic stressはp38カスケードを活性化していることが分かった。この時、dATF-2のリン酸化を示すシグナルも僅かながら亢進していることから、p38 kinaseの下流でdATF-2が機能していることが示唆された。

Physical chemistry (Radiation, UV, anti-aging agent)(TNFa、Fas ligand)は、JNK (c-Jun N-terminal kinase)やp38のSAPK (stress-activated protein kinase) CRE (cAMP response element) The binding factor CREB/ATF is a component of ATF-2. The function of ATF-2 is regulated by the function of dATF-2. The dorsal closure of JNK during embryo development and the acidification of Jun are the main functions of JNK. dATF-2 and dJun's RNAi, Dorsal Closure's Abnormal Detection, dJun's RNAi Dorsal Closure Defect, dATF-2's Field Dorsal Closure's Abnormal Detection. Physico-chemical methods for the activation of dATF-2 in vivo and for the regulation of osmotic stress by 0.1M NaCl in larvae and for the acidification of dATF-2 in p38. After NaCl treatment, larvae extract anti-MEKK and p38 kinase acidified antibodies Western blotting, MEKK, p38 kinase acidified and recognized, larvae osmotic stress anti-p38 kinase activated. When the p38 kinase is activated, the p38 kinase is activated.