RNAiを用いたショウジョウバエATF-2のアポートシスへの機能解析
利用 RNAi 分析果蝇 ATF-2 在细胞凋亡中的功能
基本信息
- 批准号:13216104
- 负责人:
- 金额:$ 3.01万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
- 财政年份:2001
- 资助国家:日本
- 起止时间:2001 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
放射線、紫外線やサイトカインによって活性化されるJNK(c-Jun N-terminal kinase)やp38のSAPK(stress-activated protein kinase)は、CRE(cAMP response element)を持つ遺伝子群の発現を活性化する一群のCRE結合因子CREB/ATFファミリーの一つATF-2をリン酸化し、ATF-2の転写を活性化する。ATF-2の機能を解析するため、遺伝学的解析の容易なショウジョウバエにおいて、ショウジョウバエATF-2(dATF-2)のdouble-stranded(ds)RNAを発現するDNA template(dATF-2 geneを7baseのスペーサーを挟んでinverted repaetに繋げたもの)を構築し、dsRNAを異所的に発現させて遺伝子機能を欠損させる方法(conditional RNAi)を行った。しかし、dATF-2の発現量が多いため、この方法ではdATF-2の機能を完全に欠損させることは出来なかった。そこで、胚にdATF-2のdsRNAを直接injrctionしてdATF-2の機能を調べた。ショウジョウバエJNKは胚発生期のdorsal closure(背部閉塞)という現象にJunのリン酸化を介して機能している。dATF-2とdJunのRNAiを行って、dorsal closureの異常が観察されるかどうか調べたところ、dJunのRNAiはdorsal closure defectが見られたが、dATF-2の場合はdorsal closureに異常は認められなかった。また、培養細胞を用いたdATF-2のリン酸化実験におても、dJNKはdJunを効率よくリン酸化するのに対し、dATF-2を殆どリン酸化しないことが分かった。これらの結果は、脊椎動物でのJNK-dATF-2のシグナル経路とは異なり、ショウジョウバエ胚発生ではJNKはATF-2を活性化するシグナル経路は存在しないことが明らかになった。今後、p38とdATF-2の関係を遺伝学的並びに生化学的実験により検討する。
The activation of JNK(c-Jun N-terminal kinase), SAPK(stress-activated protein kinase) of p38, CRE(cAMP response element), CREB/ATF binding factors, ATF-2 activation, ATF-2 activation, etc. The DNA template(7base of ATF-2 gene) for double-stranded(ds)RNA development of ATF-2(dATF-2) was constructed and dsRNA was developed using conditional RNAi. DATF-2's ability to function is completely lacking. DATF-2 dsRNA directly modulates the function of DATF-2. The dorsal closure of JNK during embryo development and the acidification of Jun are the main functions of JNK. dATF-2 and dJun's RNAi, Dorsal Closure's Abnormal Detection, dJun's RNAi Dorsal Closure Defect, dATF-2's Field Dorsal Closure's Abnormal Detection. DATF-2 is used in cell culture to regulate the activity of dJNK and dJun. The results of this study are that the JNK-dATF-2 pathway in vertebrates is different, and it is clear that the JNK-dATF-2 pathway that activates JNK and ATF-2 exists after the emergence of the gene. In the future, the relationship between p38 and dATF-2 will be discussed in both genetic and biochemical ways.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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Okada:“Myb 通过诱导果蝇眼成象盘中细胞周期蛋白 B 的表达来控制 G2/M 期进程”EMBO J..(正在出版)。
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