ショウジョウバエHh/dCBP/Ci伝達系に関与する遺伝子の単離同定
果蝇Hh/dCBP/Ci传递系统相关基因的分离和鉴定
基本信息
- 批准号:12026241
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ショウジョウバエで単離されたHedgehog(Hh)は、形態形成に重要な機能を持っている。Hh伝達系に働く因子としては転写因子cubitus interruptus(ci)の転写活性化能を調節するdCBPを含め、Ci蛋白質のmicrotubleへのretention、activator Ci^<155>からrepressor Ci^<75>への切断分解、核内/外移行といった様々なCi調節機構に関与する因子が同定されている。我々はyeast two hybrid法を用いて、Ci蛋白質の活性を調節している新規因子の単離を試みた。その結果、1007a.aの因子を新規に単離することが出来た。我々はこの因子をCip(Ci interacting protein)と名付け、cipの機能を解析するため、cip突然変異体をPelement挿入法により単離した。翅成虫原基におけるCipの発現を抗Cip抗体で調べた結果、Cip蛋白質はCi^<155>が高濃度に存在する前後区画境界近傍では発現は低レベルで、Ci^<75>が高濃度に存在する境界の前部区画では4-6細胞の幅で高レベルに発現していた。yeast two hybrid及びin vitro結合実験により、Cipタンパク質は二種類のCiタンパク質に結合するため、Cipが異なるCi蛋白質に対して、どの様な機能活性を持っているかを、突然変異体を用いて遺伝学的モザイク解析により調べた。前部区画にcip欠損クローン並びに強制発現クローンを誘導しても、その領域内でCi^<75>の標的遺伝子であるhh、dppの発現に変化は見られなかったことから、CipはCi^<75>の転写抑制活性に対しては、影響を及ぼさないことが分かった。Ci^<155>が高レベルに存在する境界領域にcipホモクローンを誘導すると、Ci^<155>の標的遺伝子dpp、ptcの発現の上昇が認められ、反対に、強制発現させると、それらの発現が著しく抑制された。Cipにより発現が影響されないactinプロモーターを用いてCiとCipをco-expressionさせ、Ci蛋白質レベルを抗Ci抗体で調べると、Cipを共発現させた場合にのみ、Ci蛋白質を検出することが出来なかった。Ci^<155>が存在する前後区画境界にCipを強制発現させても内在性のCi蛋白質は完全に消失していたことから、Cipは前部区画において、Ci^<155>の蛋白質レベルを抑え、境界の広がりを制限する機能を持っていると推測される。
Youdaoplaceholder0 is related to された, Hedgehog(Hh) された, morphogenesis に, and important な functions を support って る る. Hh 伝 da system に 働 く factor と し て は planning write factor cubitus interruptus (ci) の planning can write activeness adjust を す る dCBP を め, ci protein の microtuble へ の retention, the activator ci ^ < 155 > か ら repressor Ci ^ < 75 > へ の cut decomposition, nuclear inside/outside migration と い っ た others 々 な Ci regulator に masato and す る factor が be さ れ て い る. を I 々 は yeast two hybrid method with い て, Ci の active を regulate し て い る new rules factor の 単 from を try み た. Youdaoplaceholder0 そ results, 1007a.a <s:1> factor を new regulations に単 come out する とが とが た た. I 々 は こ の factor を Cip (Ci interacting protein) と pay け, Cip の function を parsing す る た め, Cip suddenly - variant を Pelement scions into laws に よ り 単 from し た. Wing adult primordium に お け る Cip の 発 now を Cip antibody で adjustable resistance べ た results, Cip protein は Ci ^ < 155 > が high-concentration に exist す る area before and after painting realm nearly alongside で は 発 now は low レ ベ ル で, Ci ^ < 75 > が high-concentration に exist す る realm の front area painting で は 4-6 cells の high amplitude で レ ベ ル に 発 now し て い た. yeast two hybrid and びin Vitro combining be 験 に よ り, Cip タ ン パ ク qualitative は two kinds の Ci タ ン パ ク qualitative に combining す る た め, Cip が different な る Ci protein に し seaborne て, ど の others な function active を hold っ て い る か を, suddenly - foreign を い て but 伝 learn モ ザ イ ク parsing に よ り adjustable べ た. Front area painting に cip owe loss ク ロ ー ン and び に forced 発 now ク ロ ー ン を induced し て も, そ の field で Ci ^ < 75 > の mark heritage 伝 son で あ る hh, DPP の 発 に now - the は see ら れ な か っ た こ と か ら, cip は Ci ^ < 75 > の planning write inhibitory activity に し seaborne て は, influence を and ぼ さ な い こ と が points か っ た. Ci ^ < 155 > high が レ ベ ル に exist す る border areas に cip ホ モ ク ロ ー ン を induced す る と, Ci ^ < 155 > の mark heritage 伝 DPP, PTC の 発 の rise が now recognize め ら れ, anti polices に, forced 発 now さ せ る と, そ れ ら の 発 が now the し く inhibit さ れ た. Cip に よ り 発 が now affect さ れ な い actin プ ロ モ ー タ ー を with い て Ci と Cip を co - expression さ せ, Ci protein レ ベ ル を Ci antibody で adjustable resistance べ る と, Cip を 発 now さ せ た occasions に の み, Ci protein を 検 out す る こ と が out な か っ た. Ci ^ < 155 > が exist す る area before and after painting realm に Cip を forced 発 now さ せ て も internality の Ci protein は に disappear completely し て い た こ と か ら, Cip は front area に お い て, Ci ^ < 155 > の protein レ ベ ル を え suppression and realm の hiroo が り limitations を す る function を hold っ て い る と speculation さ れ る.
项目成果
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