三量体GTP結合蛋白質による細胞接着・運動の制御機構

三聚体 GTP 结合蛋白控制细胞粘附和运动的机制

基本信息

批准号：
14028073
负责人：
浅野富子
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

三量体G蛋白質による細胞接着・運動の制御機構を明らかにすることを目的にし、HeLa細胞におけるGq/11が誘導する接着斑様構造形成のメカニズムを昨年度に続き検討した。活性化型Gα11による接着斑様構造の形成は、カスパーゼによりRhoキナーゼ(ROCK-1)が切断されて活性化されたためであることが明らかになったので、Gαq/11によるカスパーゼの活性化機構を追求した。Bcl-2の過剰発現でROCK-1の切断が阻害されたのでミトコンドリア系細胞死シグナルの関与が示唆された。Aktの活性化型を発現してもカスパーゼの活性化が抑制された。インスリン刺激によりAktのリン酸化が増加するが、この増加はGq/11刺激で抑制された。Gq/11によるAktの活性化抑制についてさらに検討し、次の2つの経路の関与が明らかになった。1)IRS-1に特異的なチロシンホスファターゼが関与する経路:Gq/11刺激によるAktのリン酸化抑制は、orthovanadateにより一部回復した。インスリン受容体や基質のIRS-1のチロシンリン酸化のレベルはインスリン刺激で高くなるが、Gq/11刺激でIRS-1のリン酸化は有意に減少したが、インスリン受容体のリン酸化は変化しなかった。orthovanadate存在下ではインスリン単独、インスリン+Gq/11刺激どちらの場合もチロシンリン酸化のレベルは高くなったが、両者間で有意の差が見られなくなった。2)Rhoを介する経路:Rhoドミナントネガティブ変異体を発現するとGq/11によるAktのリン酸化の抑制が一部回復した。Gq/11刺激で内在性RhoAの活性化が観察された。これら2つの経路の阻害はどちらも部分的な効果しか示さないが、orthovanadateとRhoドミナントネガティブ体を同時に作用させると、Gq/11によるAktのリン酸化抑制およびROCK-1の切断はほぼ完全に消失した。これらの結果は両経路が独立なものであること、Gq/11により同時に活性化されることを示している。

为了阐明三聚体G蛋白的细胞粘附和运动的机制，我们继续研究下财政年度在HeLa细胞中GQ/11诱导的类似粘附的结构形成的机理。据表明，活化的Gα11通过激活的Gα11形成类似粘附的结构是由于caspase通过caspase裂解Rho激酶（Rock-1），因此采用了GαQ/11 caspase激活CASPase的机制。 Bcl-2的过表达抑制了岩石-1裂解，表明线粒体细胞死亡信号的参与。 Akt激活形式的表达抑制了caspase的激活。胰岛素刺激增加了AKT的磷酸化，但是GQ/11刺激抑制了这种增加。 GQ/11对AKT激活抑制AKT激活的进一步研究表明，以下两种途径的参与：1）涉及IRS-1特异性酪氨酸磷酸酶的途径：GQ/11刺激对AKT的抑制AKT抑制作用由Orthovanadate部分恢复。 IRS-1胰岛素受体和底物的酪氨酸磷酸化水平随胰岛素刺激而增加，但是随着GQ/11刺激，IRS-1磷酸化显着降低，但不能改变胰岛素受体磷酸化。在正丙酸酯存在的情况下，在两种单独的胰岛素和胰岛素 + GQ/11刺激的情况下，酪氨酸磷酸化水平均升高，但两者之间没有发现显着差异。 2）RHO介导的途径：Rho显性阴性突变体的表达部分恢复了GQ/11对Akt磷酸化的抑制。用GQ/11刺激观察到内源性RhoA的激活。这两种途径的两种抑制都仅显示部分作用，但是当正叉酸和Rho显性负体同时激活时，几乎完全消除了GQ/11和Rock-1裂解的Akt磷酸化。这些结果表明，这两种途径都是独立的，并且被GQ/11同时激活。