三量体GTP結合蛋白質による細胞接着・運動の制御機構の解明

阐明三聚体 GTP 结合蛋白对细胞粘附和运动的控制机制

• 批准号: 13216118
• 负责人: 浅野 富子
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216118/
• 关键词: G蛋白質; 接着斑; Rho; Rhoキナーゼ; アポトーシス; カスパーゼ; アセチルコリン受容体; HeLa細胞

三量体G蛋白質による細胞接着・運動の制御機構を明らかにすることを目標に、今年度はHeLa細胞における三量体G蛋白質Gα11による強い接着斑様構造形成のメカニズムを検討した。私達は以前、HeLa細胞にGβγを発現させると、活性型Gα12と同様にアクチンストレスファイバーと接着斑の形成を引き起こすことを報告した。これらの形成はRhoのドミナントネガティブ変異体とRhoキナーゼ阻害剤Y-27632により阻害されることから、Rho、Rhoキナーゼ依存性と考えられる。一方、活性化型Gα11を発現させるとストレスファイバーは見られないが、ビンキュリン抗体で強く染色される接着斑様の構造が形成された。この形成はRhoキナーゼ依存性であるが、Rhoには非依存性であった。HeLa細胞では活性化型Gα11の発現によりカスパーゼが活性化され、アポトーシスが誘導されること、活性化されたカスパーゼによりRhoキナーゼROCK-Iの切断が起こることが判明した。切断部位はAsp-1113で、N端側のフラグメントは活性化型であることを示した。また、Gq/11を活性化するm1ムスカリン性アセチルコリン受容体刺激でもROCK-Iの切断が起こり、ビンキュリンを含む接着斑様の構造を形成することから生理的条件下でも起こる反応と考えられる。本研究では、ROCK-IのC末端側が切除されて活性化されるというRhoを介さないRhoキナーゼの活性化機構が明らかになった。G11からカスパーゼ活性化への伝達機構は今後の課題であるが、Gq/11のよく知られた下流の反応であるプロテインキナーゼCの阻害剤やCa^<2+>のキレート剤では活性型Gα11によるROCK-Iの切断は抑制されなかったので、これらを介するシグナル伝達ではないと考えられる。活性型Gα11をNIH3T3細胞に発現してもアポトーシスは誘導されず、細胞特異性のある反応であった。一連の反応に関与する分子の内おそらく少なくともどれか1つがNIH3T3細胞には欠けていると推定される。

Three quantity body G protein に よ る cells, then movement の system, the royal institution を Ming ら か に す る こ と を target に, our は HeLa に お け る three quantity body alpha 11 G protein G に よ る strong い then spot others の structure formation メ カ ニ ズ ム を beg し 検 た. Private は ago, HeLa に G beta gamma を 発 now さ せ る と, reactive type G alpha 12 と with others に ア ク チ ン ス ト レ ス フ ァ イ バ ー と then spot の formation を lead き こ す こ と を report し た. こ れ ら の form は Rho の ド ミ ナ ン ト ネ ガ テ ィ ブ - variant と Rho キ ナ ー ゼ resistance against one of Y - 27632 に よ り resistance against さ れ る こ と か ら, Rho, Rho キ ナ ー ゼ dependency と exam え ら れ る. One party, the activity type G alpha 11 を 発 now さ せ る と ス ト レ ス フ ァ イ バ ー は see ら れ な い が, ビ ン キ ュ リ で strong く ン antibody staining さ れ る then spot others が の structure formed さ れ た. The <s:1> キナ form ゼ dependence であるが and に <s:1> non-dependence であった of Rho. HeLa で は activation type G alpha 11 の 発 now に よ り カ ス パ ー ゼ が activeness さ れ, ア ポ ト ー シ ス が induced さ れ る こ と, active さ れ た カ ス パ ー ゼ に よ り Rho キ ナ ー ゼ ROCK -i の cut が up こ る こ と が.at し た. The cut-off site で Asp-1113で, n-terminal side で フラグメ ト ト activated type である た とを とを indicates た た. ま た を activeness, Gq / 11 す る m1 ム ス カ リ ン sex ア セ チ ル コ リ ン under let body で も ROCK -i の cut が up こ り, ビ ン キ ュ リ ン を containing む then spot others を の structure form す る こ と か ら physiological conditions で も up こ る anti 応 と exam え ら れ る. This study で は, ROCK -i の C terminal side が excision さ れ て activeness さ れ る と い う Rho を interface さ な い Rho キ ナ ー ゼ の activeness institutions が Ming ら か に な っ た. G11 か ら カ ス パ ー ゼ activeness へ の 伝 of institutions は の topics in future で あ る が, Gq / 11 の よ く know ら れ た obscene の anti 応 で あ る プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ の resistance against tonic や Ca C ^ 2 + > < の キ レ ー ト tonic で は activity type G alpha 11 に よ る ROCK -i の cut は inhibit さ れ な か っ た の で, こ れ ら を interface す る シ グ Youdaoplaceholder0 伝 伝 reach で な な と と test えられる. Active type G alpha 11 を NIH3T3 cells に 発 now し て も ア ポ ト ー シ ス は induced さ れ ず, cell specificity の あ る anti 応 で あ っ た. For の anti 応 に masato and す る molecules within の お そ ら く less な く と も ど れ か 1 つ が NIH3T3 cells に は owe け て い る と presumption さ れ る.

项目成果

Asano, T.: "Selective localization of G protein γ5 subunit in the subventricular zone of the lateral ventricle and rostral migratory stream of the adult rat brain"J.Neurochem.. 79(6). 1129-1135 (2001)

Asano, T.：“G 蛋白 γ5 亚基在成年大鼠大脑侧脑室和头端迁移流的室下区的选择性定位”J.Neurochem.. 79(6) (2001)。

Abe, M.: "Goniodomin A, an antifungal polyether macrolide, exhibits antiangiogenic activities via inhibition of actin reorganization in endothelial cells."J.Cell.Physiol. 190(1). 109-116 (2002)

Abe, M.：“Goniodomin A 是一种抗真菌聚醚大环内酯，通过抑制内皮细胞中的肌动蛋白重组而表现出抗血管生成活性。”J.Cell.Physiol。

Kinoshita, M.: "Binding of Gαo N terminus is responsible for the voltage-resistant inhibition of α1A(P/Q-type, Cav2.1)Ca^<2+> channels"J. Biol. Chem.. 276(31). 28731-28738 (2001)

Kinoshita, M.：“Gαo N 末端的结合负责 α1A(P/Q 型，Cav2.1)Ca^<2+> 通道的耐电压抑制”J. Biol。 ）28731-28738（2001）。

Ueda, H.: "Gα11 induces caspase-mediated proteolytic activation of Rho-associated kinase, ROCK-I, in HeLa cells"J.Biol.Chem.. 276(45). 42527-42533 (2001)

Ueda, H.：“Gα11 在 HeLa 细胞中诱导 Rho 相关激酶 ROCK-I 的半胱天冬酶介导的蛋白水解激活”J.Biol.Chem.. 276(45) (2001)。

上田 浩: "三量体G蛋白質によるRhoファミリー低分子量G蛋白質を介する細胞骨格制御"生化学. 73(7). 568-571 (2001)

Hiroshi Ueda：“三聚体 G 蛋白和 Rho 家族低分子量 G 蛋白介导的细胞骨架调节”生物化学 73(7) (2001)。