各種変異p53遺伝子導入細胞のマイクロプレートによる放射線・制癌剤感受性の測定

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1、4種類の変異p53遺伝子を導入した細胞の放射線感受性を測定したところ、放射線感受性がp53の変異部位によって異った。放射線感受性と相関している項目は、yeast functional assayの判定とアポトーシスの誘導であった。また、いくつかの制癌剤に対する感受性を調べたところ、制癌剤によって変異p53遺伝子導入細胞の感受性が異なった。2、これらの実験結果をもとにして、データベースによる各種癌細胞におけるp53の変異部位を検索して、p53タンパク質アミノ酸配列全領域での変異部位、変異頻度、どのアミノ酸へ変異したかを調べて、作成すべき変異p53遺伝子のデザインを行った。3、デザインした変異p53遺伝子を人工的に作成した。最終的には、癌細胞でよく見つかっている変異p53を70種類、リン酸化やアセチル化が起こる部位の変異を27種類作成した。4、これら約100種類の変異p53遺伝子DNAを精製した。5、精製した変異p53遺伝子DNAを細胞に導入した。リン酸化やアセチル化が起こる部位の変異p53遺伝子は、ほぼ全ての遺伝子導入が完了した。また、癌細胞でよく見つかっている変異p53は、約半数で細胞への遺伝子導入が行われた。