各種変異p53遺伝子導入細胞による放射線治療と制癌剤のスクリーニングシステム

(1)4種類の変異p53遺伝子を導入した細胞の放射線感受性を測定したところ放射線感受性が、p53の変異部位によって異った。放射線感受性と相関している項目は、yeast functional assayの判定とアポトーシスの誘導であった。また、いくつかの制癌剤に対する感受性を調べたところ、制癌剤によって変異p53遺伝子導入細胞の感受性が異なった。(2)これらの実験結果をもとにして、データベースによる各種癌細胞におけるp53の変異部位を検索して、p53タンパク質アミノ酸配列全領域での変異部位、変異頻度、どのアミノ酸へ変異したかを調べて、作成すべき変異p53遺伝子のデザインを行った。(3)デザインした変異p53遺伝子のうち、変異頻度が比較的多いものから順に人工的に変異を導入した。初めはアマーシャム社のSculptorにより変異p53遺伝子を作成していたが、製造中止となり、同社の新製品であるU.S.E.Mutagenesis kitにより変異p53遺伝子を作成した。しかし、この新しい商品は変異導入を細胞導入発現ベクター上で行えるものであるが、変異導入効率が低く変異の導入が成功したかどうかはシークエンスを行わないと分からない為、変異遺伝子の作成に時間がかり、現在も変異p53遺伝子の作成を続けている。

(1)4種類の変異p53遺伝子を導入した細胞の放射線感受性を測定したところ放射線感受性が、p53の変異部位によって異った。放射線感受性と相関している項目は、yeast functional assayの判定とアポトーシスの誘導であった。また、いくつかの制癌剤に対する感受性を調べたところ、制癌剤によって変異p53遺伝子導入細胞の感受性が異なった。(2)これらの実験結果をもとにして、データベースによる各種癌細胞におけるp53の変異部位を検索して、p53タンパク質アミノ酸配列全領域での変異部位、変異頻度、どのアミノ酸へ変異したかを調べて、作成すべき変異p53遺伝子のデザインを行った。(3)デザインした変異p53遺伝子のうち、変異頻度が比較的多いものから順に人工的に変異を導入した。初めはアマーシャム社のSculptorにより変異p53遺伝子を作成していたが、製造中止となり、同社の新製品であるU.S.E.Mutagenesis kitにより変異p53遺伝子を作成した。しかし、この新しい商品は変異導入を細胞導入発現ベクター上で行えるものであるが、変異導入効率が低く変異の導入が成功したかどうかはシークエンスを行わないと分からない為、変異遺伝子の作成に時間がかり、現在も変異p53遺伝子の作成を続けている。