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癌特異的な分泌型シアル酸転移酵素を癌スクリーニングに用いるための基礎研究

利用癌症特异性分泌型唾液酸转移酶进行癌症筛查的基础研究

基本信息

批准号：
14030089
负责人：
北爪しのぶ
金额：
$ 3.01万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030089/
关键词：
シアル酸転移酵素 St6Gal l 分泌 BACE1 エキソペプチダーゼ MALDI-TOFMS

项目摘要

本年度は、膜に結合したシアル酸転移酵素はBACE1で切断された後、単純に細胞外に可溶型酵素として分泌されるわけではなく、実は細胞内輸送過程で巧妙なプロセシングを受けた末に分泌されることを見出した。まず第一に本研究者らはin vitroでST6Gal lをBACE1で切断する実験系を確立し、切断部位を調べることにした。ST6Gal lの切断部位を含む合成ペプチドを基質とし、BACE1-Fcを用いて酵素反応を行い、MALDl-TOFMSを用いて反応産物の解析を行った。その結果、in vitroの実験では、BACE1はST6Gal lをGln^<37>とLeu^<38>の間で切断することが明らかになった。この切断部位は、P1部位としてLeuを好むと報告されているBACE1の基質特異性と符合するものの、なぜ細胞外へ分泌された可溶型ST6Gal lがこの切断部位より3アミノ酸残基短いGlu^<41>から始まっているのかという新たな疑問が生じてきた。本研究者らは、ST6Gal lがBACE1によってGln^<37>とLeu^<38>の間で切断された後(以後、この反応産物をST6Gal l Q38型と呼ぶ)に分泌されるまでの過程において、何らかのプロテアーゼ活性がアミノ末端側のQAKという3アミノ酸残基を切断するのでないか、と推測し、このような酵素活性の検出を目指した。ST6Gal l Q38型を基質とし、培養細胞から調製したミクロソーム画分を酵素画分として酵素活性を検出することを試みた結果、ミクロソーム画分を界面活性剤で可溶化した時のみ酵素活性が見出されたことから、膜内腔側にプロテアーゼ活性が存在することが想像された。このようなプロテアーゼ活性は、ST6Gal lをBACE1が切断した後のQ38型にのみ作用し、ST6Gal lそのものを基質としないことから、エキソペプチダーゼに属すると考えられる。

This year, the membrane binding enzyme BACE1 was cut off, and the extracellular soluble enzyme was secreted. The intracellular transport process was cleverly secreted. First, the researcher established the system of disconnection in vitro ST6Gal 1, and adjusted the location of disconnection. ST6 Gal contains the enzyme matrix, BACE1-Fc and MALD1-TOFMS. As a result, in vitro, BACE1 was cut off from ST6Gal l<37><38>. The cleavage site, P1 site and Leu site are reported to be BACE1 stroma specific, and the extracellular secretion of soluble ST6 Gal 1 is reported to be BACE1 stroma specific<41>. The present researchers pointed out the process of secretion of ST6 Gal l BACE1 after the cleavage of Gln^<37>and Leu^<38>(later, the reaction product ST6 Gal l Q38 type), how the enzyme activity of ST6 Gal l BACE 1 was secreted, and how the enzyme activity of ST6 Gal l BACE 1 was detected after the cleavage of the terminal QAK ^and Leu ^acid residues. ST6Gal 1 Q38 substrate, culture, enzyme activity, enzyme activity This is the first time that the Q38 model has been used since the ST6Gal BACE1 was cut off.