内分泌攪乱物質のProteasomeによる核内受容体turnoverに及ぼす影響

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本研究では,核内受容体特にEDCの作用機序に深く関わっているestrogen receptor(ER)のturnoverへのEDCの影響について調べ,EDCの新しい作用機序として受容体のturnover即ち安定性への影響を検討している.我々はVDRのAF-2領域と結合する蛋白をscreeningして得られたcloneの一つ,suppressor for gal-1(SUG1)がVDRやPXRのproteasomeを介した受容体蛋白分解に関与していることを報告してきた.今年度はER蛋白分解機構でのSUG1の役割と生殖臓器での発現を検討した.まずYeast two-hybrid法を用いてERとSUG1の結合を検討すると,SUG1はリガンド依存性にERαやERβと結合した.次にER発現細胞にproteasome阻害剤を投与したところERαやERβ蛋白分解が抑制された.さらにSUG1を過剰発現させてERを介した転写への影響を検討すると,SUG1によりERαやERβによる転写活性は抑制された.またSUG1過剰発現細胞ではリガンド存在下でERαとERβ共にproteolytic fragmentが発現しており,polyubiquitin affinity beadsを用いたpull down assayではリガンド存在下でpolyubiquitin化したERαとERβの発現を認めた.エストロゲン様作用物質のBisphenol AはERαとERβ両方のリガンドであるがERβ-SUG1結合を誘導せず,Bisphenol Aの存在下ではSUG1過剰発現細胞でproteolytic fragmentやpolyubiquitin化したERβは発現しなかった.SUG1は肝臓,小腸の他に子宮や卵巣でも発現を認め,子宮内膜では正常例に比しホルモン剤投与例で強く発現していた.以上よりSUG1はUbiquitin/Proteasomeを介したER蛋白のturnoverに関与していると考えられた.SUG1は生殖臓器にも発現しており,高ステロイドホルモン暴露下の子宮内膜で発現が増加していたことから生殖機能においても何らかの役割を果たしていると考えられた.