内分泌攪乱物質によるマウス未成熟卵母細胞のカルシウム振動擾乱機構の研究

内分泌干​​扰物干扰未成熟小鼠卵母细胞钙振荡机制的研究

基本信息

  • 批准号:
    14042268
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.56万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

目的エストロゲン類似内分泌攪乱物質の未成熟卵母細胞(以下、卵母細胞)に対する作用を調べるために、マウス卵母細胞の自発的カルシウム(Ca^<2+>)振動に対するエストロゲン(17β-estoradiol ; E2)の効果を調べる。また卵母細胞の自発的Ca^<2+>振動の生理的意義を検討する。方法ICR雌マウスを用い、単離卵母細胞と卵巣スライスで細胞内Ca^<2+>の蛍光測定を行った。単離卵母細胞はCa^<2+>結合蛍光色素Fura-2AMで染色し、顕微鏡下で蛍光による自発的Ca^<2+>振動測定と同時に明視野の形態変化観察を行った。Ca^<2+>蛍光測定には高速Ca^<2+>蛍光解析装置Argus HiSCA(浜松ホトニクス)を用いた。一方、卵巣スライスもFura-2AMで染色し、Argus50(浜松ホトニクス)で観察測定した。卵培養液(M2)を潅流後、様々な濃度(1nM-10μM)のE2およびE2-BSA(細胞膜不透過のE2)を含むM2を潅流した時のCa^<2+>振動の変化を測定、解析した。結果と考察(A)単離卵母細胞の約70%が自発的Ca^<2+>振動を示した。(B)E2、E2-BSAはともにCa^<2+>振動の持続時間を濃度依存性(1nM-1μM)に短縮するだけでなく、振動パターンを乱し、振動数を有意に減少させた。このことから、E2の抑制作用は細胞膜を介すると考えられる。(C)卵巣スライスの卵母細胞も信号は小さいが自発的Ca^<2+>振動を示したので、この生理的重要性について、更なる研究が待たれる。(D)エストロゲン類似内分泌攪乱物質、ビスフェノールA(BPA)の卵母細胞への潅流投与(10μM)は、規則的Ca^<2+>振動のパターンを乱し、振動を可逆的に停止した。この振動パターン撹乱作用は、E2やE2-BSAに比べて顕著であったことからBPAの卵細胞成熟過程に対する影響が危惧され、今後益々の研究が望まれる。
Purpose エ ス ト ロ ゲ ン similar endocrine disrupting substances の immature oocytes (hereinafter, oocyte) に す seaborne る role を adjustable べ る た め に, マ ウ ス oocytes の from 発 カ ル シ ウ ム (Ca ^ < + > 2) vibration に す seaborne る エ ス ト ロ ゲ ン (17 beta estoradiol; E2) の unseen fruit を adjustable べ る. Youdaoplaceholder0 The physiological significance of the <s:1> self-occurring Ca^<2+> vibration in oocytes を検 discuss する. Method: The intracellular Ca^<2+> in the <s:1> 蛍 cells of と oocytes and スラ <s:1> スで cells of ICR female ウスを ウスを was determined by を and 単 to 蛍 and った light. 単 from oocytes は Ca ^ 2 + > < combining 蛍 photopigment Fura - 2 am で dyeing し, 顕 micro microscopically で 蛍 light に よ る since 発 Ca ^ 2 + > < vibration measurement と に Ming field of vision at the same time の morphology - line 観 examine を っ た. Ca ^ 2 + > < 蛍 light に は high-speed Ca ^ 2 + < > 蛍 optical analytical device Argus HiSCA (city pine ホ ト ニ ク ス) を with い た. One side, oocytes スラ ス ス Fura-2AMで staining スラ, Argus50(hamamatsu ホトニ ス)で観 assay た た. Eggs nutrient solution (M2) を 潅 flow after, others 々 な concentration (1 nm to 10 microns) の E2 お よ び E2 - BSA (membrane through の E2) contains を む M2 を 潅 flow し た の when Ca ^ < 2 + > vibration の - を determination and analytical し た. The results と examined (A)単 about 70% of the oocytes が self-generated Ca^<2+> vibrations を indicated that た た. (B) E2 and E2 - BSA は と も に Ca ^ 2 + < > vibration の を 続 time concentration dependence mu (1 nm - 1 M) に shortening す る だ け で な く, vibration パ タ ー ン を disorderly し, vibration reduced を intentionally に さ せ た. The inhibitory effect of <s:1> <s:1> と ら and E2 <s:1> on the cell membrane を is すると investigated えられる. (C) eggs 巣 ス ラ イ ス の oocytes も small signal は さ い が since 発 Ca ^ 2 + > < vibration を shown し た の で, こ の physiological importance of に つ い て, more な る research が stay た れ る. (D) エ ス ト ロ ゲ ン similar endocrine disrupting substances, ビ ス フ ェ ノ ー ル A (BPA) の oocytes へ の 潅 cast and flow (10 microns) は, rules of Ca ^ 2 + > < vibration の パ タ ー ン を disorderly し, vibration を reversible に stop し た. こ の vibration パ タ ー ン 撹 disorderly は, E2 や E2 - BSA に than べ て 顕 the で あ っ た こ と か ら BPA の egg maturation に す seaborne る influence が of it さ れ, the future profit 々 の research looking が ま れ る.

项目成果

期刊论文数量(14)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.Mohri, S.Yoshida: "Inhibitory effects of estrogen and bisphenol-A on the spontanous Ca^<2+> oscillations in immature oocytes"Jpn J Physiol Suppl. 54(in press). (2004)
T.Mohri,S.Yoshida:“雌激素和双酚A对未成熟卵母细胞自发Ca ^ 2 振荡的抑制作用”Jpn J Physiol Suppl。
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T.Mohri, S.Yoshida: "Inhibitory effect of estrogen on the spontaneous Ca^<2+> oscillations in immature mouse oocytes"American Society for Cell Biology 43rd Annual Meeting Late abstracts. L303 (2003)
T.Mohri,S.Yoshida:“雌激素对未成熟小鼠卵母细胞自发Ca ^ 2 振荡的抑制作用”美国细胞生物学学会第43届年会后期摘要。
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    0
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毛利達磨, 吉田繁: "マウス未成熟卵母細胞Ca^<2+>振動に対するエストロゲンおよびビスフェノールAの抑制効果"平成15年度研究成果報告会要旨集「内分泌撹乱物質の環境リスク」於 京大会館 2003.1.23-1.24. PA03-2 (2004)
Daruma Mouri、Shigeru Yoshida:“雌激素和双酚 A 对小鼠未成熟卵母细胞 Ca^<2+> 振荡的抑制作用”2003 年研究报告会议摘要“内分泌干扰物质的环境风险”,京都大学大厅 2003.1.23-1.24。 -2 (2004)
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    0
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毛利達磨, 須谷康一, 吉田繁: "マウス未成熟卵Ca^<2+>振動に対するエストロゲンの抑制効果 Inhibitory effect of estrogen on Ca^<2+> oscillations in mouse immature oocytes"平成14年度研究成果報告会要旨集「内分泌撹乱物質の環境リスク」於 愛媛県県民文化会館 2003.1.20-1.23. 112-113 (2003)
毛利达磨、须谷浩一、吉田茂:“雌激素对小鼠未成熟卵母细胞Ca^<2+>振荡的抑制作用”2002年研究成果报告会议摘要“内分泌干扰物质的环境风险”爱媛县文化中心2003.1.20-1.23 112-113(2003)
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毛利達磨, 吉田繁: "内分泌撹乱物質によるマウス未成熟卵母細胞のカルシウム振動擾乱機構の研究"平成14年度研究成果報告会要旨集「内分泌撹乱物質の環境リスク」於 岡崎国立共同研究機構 2002.7.6-7.7. A03-20 (2003)
毛利达磨、吉田茂:“内分泌干扰物质对未成熟小鼠卵母细胞钙振荡扰乱机制的研究”2002年研究报告会议摘要“内分泌干扰物质的环境风险”,冈崎国立协作研究机构,2002年7月。6-7.7 A03-20 (2003)
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