タンパク質内ミクロ疎水空間を利用した蛍光性バイオセンサーの構築

利用蛋白质内的微疏水空间构建荧光生物传感器

• 批准号: 14045255
• 负责人: 浜地 格
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14045255/
• 关键词: レクチン; 化学修飾; 糖バイオセンサー; アフィニティラベル; 蛍光センサー; バイオセンサー; P-PALM法; 光アフィニティーラベル; ミクロ疎水空間

前年度までに、光アフィニティラベル化後修飾法によってレクチンタンパク質の一種であるコンカナバリンAの糖認識サイト近傍に特異的な官能基を導入することに成功した。またそこに環境応答性の蛍光色素を修飾することによって、特定の糖に応答して蛍光変化を起こす新しいバイオセンサーの構築に成功した。本年はこの手法を用いて、蛍光性の人工分子認識部位(フェニルボロン酸にアントラセン部位をつないだ分子)を導入した新しい半合成レクチンを調製した。得られたレクチンは、特定のオリゴ糖の添加によって蛍光強度が増強されることが分かった。またその選択性を詳細に検討することによって、レクチンの糖結合部位の結合能力と人工分子人サイトの分子認識特性を合わせ持つ初めての半人工タンパク質であることが実証された。

In the past year, the introduction of A specific functional group near the sugar recognition site was successful by the post-chemical modification method. The environment is sensitive and the pigment is modified. The specific sugar is modified and the new pigment is successfully constructed. This year, the new method of semi-synthesis is introduced into the artificial molecular recognition site of light. The light intensity increases with the addition of specific sugar. A detailed study of the selectivity of the protein was carried out. The binding ability of the sugar binding site of the protein and the molecular recognition characteristics of the artificial molecule were investigated.

项目成果

S.KIYONAKA, S.TSUKIJI, I.HAMACHI: "Combinatorial Library of Low Molecular Weight Organo-and Hydrogelators Based on Glycosylated Amino Acid Derivatives by Solid Phase Synthesis"Chemistry, A European Journal. 9. 976-983 (2003)

S.KIYONAKA、S.TSUKIJI、I.HAMACHI：“基于固相合成糖基化氨基酸衍生物的低分子量有机和水凝胶剂的组合库”化学，欧洲期刊。

T.HIRAOKA, I.HAMACHI: "Caged RNase : Photoactivation of the Enzyme from Perfect Off-state by Site-specific Incorporation of 2-Nitrobenzyl Moiety"Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 13. 13-15 (2003)

T.HIRAOKA、I.HAMACHI：“笼状 RNase：通过 2-硝基苄基部分的位点特异性掺入实现完全关闭状态的酶的光活化”生物有机和药物化学快报。

浜地 格: ""人工タンパク質",生命化学のニューセントラルドグマ"化学同人. 8 (2002)

Itaru Hamachi：“‘人造蛋白质’，生命化学的新中心法则” Kagaku Doujin 8 (2002)。

T.NAGASE, E.NAKATA, S.SHINKAI, I.HAMACHI: "Construction of Artifical Signal Transducers on a Lectin Surface by Post-Photoaffinity-Labeling Modification for Fluorescent Sccharide Biosensors"Chemistry A European Journal. 9. 3660-3669 (2003)

T.NAGASE、E.NAKATA、S.SHINKAI、I.HAMACHI：“通过荧光 Sccharide 生物传感器的光亲和标记后修饰在凝集素表面构建人工信号传感器”欧洲化学期刊。

C.A.BEWLEY, S.KIYONAKA, I.HAMACHI: "Site-specific Discrimination by Cyanovirin-N for alfa-Linked Trisaccharides Comprising the Three Arms of Man8 and Man9"Journal of Molecular Biology. 322. 881-889 (2002)

C.A.BEWLEY、S.KIYONAKA、I.HAMACHI：“Cyanovirin-N 对包含 Man8 和 Man9 三个臂的阿尔法连接三糖的位点特异性识别”分子生物学杂志。