配位結合をトリガーとした自己組織化半合成酵素の活性スイッチ法の開発

开发一种使用配位键作为触发器来切换自组装半合成酶活性的方法

• 批准号: 13031064
• 负责人: 浜地 格
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13031064/
• 关键词: リボヌクレアーゼ; 半合成酵素; 非天然アミノ酸; オン・オフスイッチ; 極性転換

S-ペプチドはαヘリックス構造を取ることが既知なので、まずこのヘリックスの極性残基を一つだけIda4に入れ替えたSペプチドをS-プロテインと複合化した。これらの変異体の鉄イオン添加に対する応答挙動を反応初速度から見積もると、Ida4の置換位置の電荷(Glu, ASPかLys, Argかの違い)によって金属イオンによる応答挙動は全く逆になった。即ち本来Lys, Argであった部位のIda4への置換は、鉄イオン添加によって活性が増幅するが、Glu, Aspの入れ替えは鉄イオンによって活性が減少した。蛋白質骨格中に組み込まれたIda4は、中性条件ではマイナス1であるが、3価の鉄イオンを錯化するとプラス1となる。このような電荷の反転が上記のような対照的な挙動の一因と考えられた。より大きな活性変化は二置換体で見られた。6,9-Ida4と7,10-Ida4では全く反対の応答特性であった。速度論解析を行うとこの変化はkcatに依存するものであり、7,10-Ida4では鉄イオンの存在によってkcatにして20倍以上のオンオフ制御が起こった。CDスペクトルで構造変化を評価すると、鉄イオンの錯化によってαヘリックス構造がわずかに巻き戻っていることが示された。このような局所的なヘリックス構造のゲスト誘導的な巻き戻りが活性のオンオフと相関しているようである。

The structure of S-protein is selected from the group consisting of known polar residues and S-protein complexes. The charge (Glu, ASP Lys, Arg) of the substitution position of Ida4 is the charge of the initial velocity of the reaction. That is, the substitution of Lys, Arg and Ida4 increased the activity of Glu, Asp and decreased the activity of Fe. The protein structure is composed of four parts: one part, one part, and the other part. A study on the cause of the charge and the reflection of the light The activity of the two substitutions is very high. 6,9-Ida4 7,10-Ida4 Speed theory analysis: the change of kcat is dependent on the existence of kcat, 7,10-Ida, 4 times more than the change of kcat, 7 times more than the change of kcat. The structure of CD is evaluated, and the structure of CD is evaluated. The structure of the structure

项目成果

I.Hamachi et al.: "Solid-phase Lipid Synthesis (SPLS)-2:Incidental Discovery of Organogelators Based on Artificial Glycolipids"Tetrahedron Letters. 6141-6145 (2001)

I.Hamachi 等人：“固相脂质合成（SPLS）-2：基于人工糖脂的有机凝胶剂的偶然发现”四面体快报。

I.Hamachi et al.: "Pd(en) as a Sequence-Selective Molecular Pinch for -Helical Peptides"Chemistry Letters. 16-17 (2001)

I.Hamachi 等人：“Pd(en) 作为螺旋肽的序列选择性分子箍缩”化学快报。