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レプリコンを用いたC型肝炎ウイルス・宿主間相互作用の分子機序に関する研究

利用复制子研究丙型肝炎病毒与宿主相互作用的分子机制

基本信息

批准号：
16017262
负责人：
堀田博
金额：
$ 6.02万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.NS3とp53の相互作用の解析:臨床分離株から得られた種々のアミノ酸配列を有するNS3を単独で培養細胞に発現させた場合、その細胞内局在は3通りパターン(斑点状、びまん性および混合型)に分けられた。そして、斑点状局在を示すNS3は、びまん性のものに比べて、p53とより効率よく会合し、p53機能をより強く阻害した。これらのNS3の性状は1〜数カ所のアミノ酸点変異により変化した。なかでも、NS3の106位のLeuをAlaに置換した場合にp53との会合が最も顕著に抑制された。さらに、NS3とp53の会合はHCVレプリコン(サブゲノムおよび全長ゲノム)においても見られ、p53機能がHCVレプリコン複製細胞で減弱していた。2.NS5AとSykの相互作用の解析:個々のHCV蛋白とSykを培養細胞に共発現させた場合、NS5Aのみが効率よくSykと会合し、その会合にはNS5AのN末端180残基とSykのSH2ドメインが必要であった。NS5AとSykの会合により、Sykのチロシンキナーゼ活性が阻害され、さらにSykの下流に位置するPLC-γ1の活性化も阻害された。Sykキナーゼ活性の阻害には、会合に必要なNS5AのN末端180残基のみならず、同時にISDRやPKR結合ドメインを含むキナーゼ活性制御領域が必要であった。また、HCVレプリコン(サブゲノムおよび全長ゲノム)複製細胞においても、NS5AとSykが会合することを証明した。以上の結果より、NS3の細胞内局在やp53との相互作用、及びNS5AとSykの相互作用の程度はHCVの臨床分離株間で異なっており、発癌作用を含むウイルス病原性も異なる可能性が示唆された。

Analysis of 1.NS3-p53-interaction assay: the isolated strains were separated from each other, and the isolated cells were divided into two groups: the isolated cells were separated from each other, and the cells were isolated from the cells of the isolated cells, which were separated and separated by 1.NS3 and p53. There are signs of NS3, p53, p53 and so on. The trait of "NS3" is different from one to the other, and the number of acid spots is different. The 106th position of Leu Ala in NS3 is the most important to inhibit p53 rendezvous. Both NS3 and NS3 p53 genes will join the full-length transmission of HCV genes, and p53 will be able to detect HCV genes and copy cells to detect weak DNA. Analysis of 2.NS5A-Syk interaction assay: one HCV protein Syk cell culture showed that there was a total combination of NS5A protein, Syk, and NS5A. The N-terminal residues of Syk and SH2 were detected. NS5A "Syk" converges, Syk "active" blocks, "Syk" dirty "position"PLC- γ 1" activates "block". It is necessary to detect the activity of Syk, and to meet the needs of NS5A. The combination of ISDR and PKR contains the necessary information in the field of activity control. The whole length of the system, HCV, Syk, and NS5A will be copied and the data will be displayed. The results of the above results, the degree of interaction between p53 gene and NS3 Syk, the degree of interaction between HCV and Syk, the possibility of pathogenicity and the possibility of pathogenicity in cancer cells.