レプリコンを用いたC型肝炎ウイルス・宿主間相互作用の分子機序に関する研究

利用复制子研究丙型肝炎病毒与宿主相互作用的分子机制

• 批准号: 15019063
• 负责人: 堀田 博
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019063/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; レプリコン; NS5A; コア蛋白; 点突然変異; インターフェロン; 2'-5'オリゴアデニル酸合成酵素; Akt; Protein kinase B

親株(Con1株)C型肝炎ウイルス(HCV)サブジェノミックレプリコンをもとに、リバースジェネティクスにより、NS5Aの種々の変異を持つHCVレプリコンを作製し、Huh-7細胞に導入してレプリコン複製細胞株を得た。導入した変異は第37位アミノ酸Phe->Leu変異(F37L)、Phe->Asn変異(F37N)、その他種々のISDR点突然変異等である。まず、F37Nを有するHCVレプリコン複製細胞株は全く得られず、F37NはHCV遺伝子複製にとって致死的変異であることがわかった。種々のNS5Aと2'-5'オリゴアデニル酸合成酵素(2-5AS)を発現する細胞における両蛋白の結合実験より、F37N変異NS5Aは2-5ASとの結合が弱いこと、また、脳心筋炎ウイルスのレスキュー実験より、F37N変異NS5Aはインターフェロン(IFN)抗ウイルス作用の抑制活性が弱いことを明らかにした。一方、F37L変異NS5Aは2-5ASとの結合が増加し、より強いIFN抑制作用を示した。F37L変異HCVレプリコンのIFN抑制作用は親株レプリコンと同程度であった。ISDR変異については、IFN応答性に関する臨床成績から重要と考えられる種々の点突然変異(T244A, I255V, D248G,3点〜8点変異など)を導入したHCVレプリコンを作製した。それらの変異レプリコンは親株と同程度によく複製した。これらのISDR点突然変異のうち、8点変異を除いて、IFN抗ウイルス効果の抑制は親株と同程度であった。現在、8点変異及び他の部位のISDR変異を有するレプリコンを作製し、IFN抗ウイルス効果に及ぼす影響についてさらに詳細に解析を進めている。さらに、Akt/Protein kinase B(PKB)に及ぼすHCV全蛋白の影響を調べる目的で、全長HCV遺伝子発現レプリコン複製細胞を作製している。Akt/PKB酵素活性の測定法を確立し、コア蛋白がPDGFによるArt/PKBの活性化を増強することを明らかにした。今後、全長HCVレプリコン複製細胞株における。Akt/PKB活性について詳細に検討する予定である。

The parent strain (Con1 strain) hepatitis C virus (HCV) was cloned into a recombinant HCV clone cell line by introducing the HCV clone into a Huh7 cell line. The 37th position of the introduction changes to the 37th position, such as the sudden change in Phe->Leu (F37L), the change in Phe->Asn (F37N), and the sudden change in the ISDR point. The HCV replication cell line F37N was completely successful and the HCV replication cell line F37N was lethal. The binding activity of NS5A to 2 -5AS in the production of NS5A, F37N and NS5A to 2-5AS is weak. The binding activity of NS5A to 2-5AS in the production of NS5A and F37N is weak. F37L and NS5A showed strong IFN inhibitory effect on the combination of 2-5AS. F37L has the same IFN inhibitory effect as the parent strain. ISDR is different from IFN and HCV. The clinical results are different from important tests. The sudden change of ISDR (T244A, I255V, D248G,3:00 ~ 8:00) is introduced into HCV. The difference between the two is that they are different. The ISDR point suddenly changed, the 8 point changed, and the IFN anti-ISDR effect was inhibited to the same extent. Now, 8 o'clock difference and other parts of the ISDR change have a change in the control, IFN anti-it effect and the impact of the detailed analysis In addition, Akt/Protein Kinase B(PKB) and HCV complete protein regulation are aimed at the production and replication of full-length HCV gene. Akt/PKB enzyme activity assay was established, and PDGF activity was increased. In the future, full-length HCV replication cell lines will be established. Akt/PKB activity is discussed in detail

项目成果

Goto, Eiji: "c-MIR, a human E3 ubiquitin ligase, is a functional homolog of herpesvirus proteins MIR1 and 2 and has similar activity."J Biol Chem. 278(17):. 14657-14668 (2003)

Goto, Eiji：“c-MIR 是一种人 E3 泛素连接酶，是疱疹病毒蛋白 MIR1 和 2 的功能同源物，具有相似的活性。”J Biol Chem。

Oka, Kiyomasa: "Hepatitis C virus core protein selectively inhibits synthesis and accumulation of p21/Wafl and certain nuclear proteins"Microbiol Immunol. 47(6):. 429-438 (2003)

Oka，Kiyomasa：“丙型肝炎病毒核心蛋白选择性抑制 p21/Wafl 和某些核蛋白的合成和积累”Microbiol Immunol。

Taguchi, Takashi: "Hepatitis C virus NS5A protein interacts with 2',5'-oligoadenylate synthetase and inhibits antiviral activity of interferon in an ISDR-independent manner."J.Gen.Virol.. 85(in press). (2004)

Taguchi, Takashi：“丙型肝炎病毒 NS5A 蛋白与 2,5-寡腺苷酸合成酶相互作用，并以独立于 ISDR 的方式抑制干扰素的抗病毒活性。”J.Gen.Virol.. 85（出版中）。

Inoue, Motomu: "A new filter-eluting solution that facilitates improved recovery of Cryptosporidium oocysts from water."J Microbiol Methods. 55. 679-686 (2003)

Inoue, Motomu：“一种新的过滤洗脱溶液，有助于提高从水中回收隐孢子虫卵囊的速度。”《微生物方法》杂志。

Lusida, Maria Inge: "Genotype and subtype analyses of hepatitis B virus (HBV) and possible co-infection of HBV and hepatitis C virus (HCV) or hepatitis D virus (HDV) in blood donors, patients with chronic liver disease and patients on hemodialysis in Sura

Lusida、Maria Inge：“对献血者、慢性肝病患者和接受治疗的患者进行乙型肝炎病毒 (HBV) 的基因型和亚型分析以及 HBV 和丙型肝炎病毒 (HCV) 或丁型肝炎病毒 (HDV) 可能的混合感染。