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培養神経細胞でプリオン蛋白質による発現制御される遺伝子群のマイクロアレイ解析

培养神经元中表达受朊病毒蛋白调节的基因的微阵列分析

基本信息

批准号：
16017320
负责人：
佐藤準一
金额：
$ 4.48万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

目的・方法:プリオン病では正常型プリオン蛋白質PrPCがcavolae-like domain(CLD)で未知のspecies-specific molecular chaperone Protein Xを介して異常型プリオン蛋白質PrPSCに構造変換される。本研究ではPrPSCによる神経細胞死誘導機序を解明するため、PrPC異常蓄積がCLDシグナル伝達系に対して障壁を形成し、下流遺伝子群発現異常を惹起するとの仮説を考案し、検証するため(1)平成16年度はPrP遺伝子恒常的高発現培養細胞の遺伝子発現プロフィールをcDNA microarrayで解析し、(2)平成17年度はヒト神経細胞のプロテオーム解析(2D-PAGE, protein overlay, mass Spectrometry, protein microarray)によりProtein X候補を探索した。結果:(1)PrPC恒常的高発現により神経変性関連遺伝子SCA12責任遺伝子PPP2R2BとPCDターゲット遺伝子CDR34の発現上昇を認めた。(2)培養ヒト神経細胞におけるPrPC結合蛋白質として14-3-3,アストロサイトの14-3-3結合蛋白質としてvimentinを同定した。14-3-3はisoform- or cell type-nonspecific, phosphorylation-independentにHsp60と結合した。Protein microarray解析により14-3-3結合蛋白質としてEAP30,DDX54,STACを同定した。考察・結論:(1)プリオン蛋白質蓄積が遺伝子発現制御異常を介して神経細胞死を惹起し得る。(2)ヒト中枢神経系で生理的条件下14-3-3,PrPC,Hsp60はtrimolecular complexを形成し、プリオン病脳ではPrPCがPrPSCに構造変換・凝集される過程で、14-3-3はcomplexから離脱し、degenerating neuronから髄液中に放出される。網羅的トランスクリムトーム・プロテオーム解析により、ヒト培養細胞におけるPrPC誘導遺伝子や結合蛋白質を同定し得た。これらはクロイツフェルトヤコブ病の診断キットや創薬ターゲットとなりうる。

Objective · Method :プリ <s:1> <s:1> disease でプリ normal type プリ <s:1> <s:1> Protein PrPCがcavolae-like domain(CLD)で unknown <s:1> special-specific molecular chaperone Protein The abnormal structure of the PrPSC of Xを intercalates て, プリに, <s:1> protein に undergoes a transformation される. This study では PrPSC による god 経 induced cell death machine sequence を interpret するため, PrPC abnormal accumulation が CLD シグナル伝 da system にし seaborne て barrier をし, dirty legacy 伝 subgroup 発 is abnormal を provoked するとのしを says 仮 case, 検するため pp.47-53 16 (1) year は PrP heritage 伝 son constant high 発 now culture cell の伝 son (1) cDNA microarrayで analysis of を, (2) analysis of <s:1> ヒト Shinto cells in Heisei 17 <s:1> プロテ <s:1> ムム (2D-PAGE, protein overlay, mass Spectrometry) protein microarray)によによ Protein X candidate を explore たた. Results: (1) PrPC constant high 発 now により経 god - sex masato even heritage 伝 child SCA12 responsibility but 伝 PPP2R2B と PCD ターゲット posthumous son 伝 CDR34 の発 now rising を recognize めた. (2) develop ヒト god 経 cells における PrPC binding protein として 14-3-3, アストロサイトの binding protein 14-3-3 として vimentin を be した. 14-3-3 た isoform-or cell type-nonspecific, phosphorylation-independentにHsp60と binding たた. Protein microarray analysis によと 14-3-3 binding proteins とててEAP30,DDX54,STACを and determinate <s:1> た. Investigation and conclusion :(1)プリ, プリ, <s:1>, protein accumulation が, resulting in 伝, abnormal control, を, て, て, and neural cell death を cause る. (2) Under the condition of ヒト central nervous system で physiology, 14-3-3,PrPC,Hsp60 で trimolecular Complex をし, プリオン disease 脳では PrPC が PrPSC に structural variations in · agglutination されでる process, the 14-3-3 は complex から from し, degenerating neuron からに released in marrow liquid される. The snare トランスクリムトーム · プロテオーム parsing により, ヒト culture cell における PrPC induced heritage 伝 son や binding protein を be した. Youdaoplaceholder2 れらロロロフェフェトヤコブ disease diagnosis キットや drug creation タゲットとなゲットとなうるうる