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フォールディング・ファネル中間層での遠隔残基間相互作用の研究

折叠漏斗中层远程残基相互作用的研究

基本信息

批准号：
16041240
负责人：
池口雅道
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Soka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ウマβラクトグロブリン(ELG)と、同じリポカリン・ファミリーに属するヒト涙リポカリン(TL)を材料として中間状態の構造を解析した。1.ELCは酸性pHでモルテン・グロビュール(MG)状態をとる。酸性pHでのCDスペクトルの塩濃度依存性を調べたところ、大きな塩濃度依存は観測されなかった。しかし、ELGは分子内に2つのジスルフィド(S-S)結合を有するので、この存在が分子の拡張を妨げている可能性が考えられた。そこでCysをAlaに置換してS-S結合を1つ無くした変異体を作製し、酸性pHでの塩濃度依存性を調べた。その結果、塩濃度の低下に伴うヘリックス含量の増加が観測され、MG構造の安定化に関する疎水相互作用の役割の重要性が確認された。2.ELGのMG状態と低温変性状態の二次構造の差異を一連のプロリン置換変異体作製とアミドプロトンの水素・重水素交換によって調べた。その結果、MG状態と低温変性状態のいずれにおいても水素交換から保護されているアミドプロトンは天然構造においてF,G,Hストランドを形成する領域とヘリックスを形成する領域に存在した。一方、アミノ酸残基をプロリンに置換してCDスペクトルがヘリックスの減少を示した領域は、MG状態ではHストランドとヘリックスを形成する領域であったのに対して、低温変性状態ではF,G,Hストランドとヘリックスを形成する領域であった。3.TLの尿素変性状態からのフォールディング反応をCDストップト・フロー法により観測した。その結果、ELGと同様に不感時間内にCDスペクトルの変化を示すが、そのスペクトルはELGのように非天然ヘリックス構造の形成を示すものではなかった。TLのアミノ酸配列はELGのように高いヘリックス形成傾向を示さないため、フォールディング初期に形成される中間体の二次構造はアミノ酸配列の二次構造形成傾向を強く反映したものであると考えられた。

The structure of the material is analyzed in the middle state. 1. ELC is acidic pH, pH Acidity pH value of CD and concentration dependence of CD and pH value of CD The possibility of the existence of 2-S (S-S) binding in ELG molecules is examined. Cys and S-S binding are regulated by pH and concentration. As a result, the decrease in the concentration of mercury was accompanied by an increase in the concentration of mercury, and the importance of water interaction in the stabilization of MG structures was confirmed. 2. The secondary structure difference between MG state and low temperature state of ELG is related to the change of temperature, temperature and temperature. As a result, MG state and low temperature change state exist in the field of water element exchange, protection and formation of natural structure. A single, non-acidic residue can be replaced by a single, non-acidic residue, and can be formed in a single, non-acidic state. 3. TL's performance status is different from that of the CD. As a result, the ELG and the non-natural structure of the ELG are not sensitive to the change of CD structure. The secondary structure of the intermediate is strongly reflected in the formation tendency of the acid sequence.