NMRによるモルテン・グロビュール構造の解析

NMR 分析熔球结构

• 批准号: 10157224
• 负责人: 池口 雅道
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10157224/
• 关键词: β-ラクトグロブリン; フォールディング; モルテン・グロビュール; NMR; 水素交換; α-ヘリックス; β-シート

1. NMRによるウマβラクトグロブリン(ELG)の天然構造解析^<15>N標識ELGの異種核相関三次元NMR測定を行い、天然状態でのNMR信号の帰属をほぼ完了した。化学シフト、核オーバーハウザー効果の解析により推定されるELGの立体構造はウシβラクトグロブリンの結晶構造とよく一致した。2. ELGのモルテン・グロビュール(MG)構造の解析MG状態で主鎖アミドプロトンの水素交換を行った後、天然構造へとリフォールドさせて、二次元NMRスペクトルを測定する方法により、ELGのMGで水素結合を形成している領域を同定した。その結果、天然構造においてA、F、G、Hストランドを形成する領域、およびC末端のへリックスに相当する領域に水素交換反応に対する保護がみられ、この領域がMG状態においても天然と同様の立体構造を形成しているものと推定された。また、天然構造でCストランドに相当する領域には弱いけれども一次構造に沿って連続的に水素交換に対する保護が観測され、MG状態ではこの領域に非天然のαヘリックスが形成されている可能性が示唆された。この点を確認するため、Proline ScanningMutagenesis実験を行ったが、プロリン置換体の多くは天然構造を獲得できず、ジスルフィド結合異性体を分離するのが困難であったため、Cys66とCys160をAlaに置換した変異体を作成し、これをベースにプロリン置換を導入する実験を行っている。

1. NMR に よ る ウ マ beta ラ ク ト グ ロ ブ リ ン (ELG) の natural structure ^ < 15 > N logo ELG の unlike nuclear masato three dimensional NMR measurement line を い, natural state で の NMR signal の 帰 genus を ほ ぼ finished し た. Chemical シ フ ト, nuclear オ ー バ ー ハ ウ ザ ー unseen fruit の parsing に よ り presumption さ れ る ELG の three-dimensional structure は ウ シ beta ラ ク ト グ ロ ブ リ ン の crystal structure と よ く consistent し た. 2. ELG の モ ル テ ン · グ ロ ビ ュ ー ル analytical MG (MG) tectonic の state で master lock ア ミ ド プ ロ ト ン の water line element exchange を っ た, natural structure after へ と リ フ ォ ー ル ド さ せ て, two dimensional NMR ス ペ ク ト ル を determination す る method に よ り, ELG の MG で water element combination を form し て い を る field with constant し た. そ の result, natural structure に お い て A, F, G, H ス ト ラ ン ド を form す る field, お よ び C terminal の へ リ ッ ク ス に quite す に る field water element exchange the 応 に す seaborne る protection が み ら れ, こ の field が MG state に お い て も with others in natural と の three-dimensional structure を form し て い る も の と presumption さ れ た. ま た, natural structure で C ス ト ラ ン ド に quite す る field に は weak い け れ ど も a tectonic に along っ て even 続 に water element exchange に す seaborne る protection が 観 measuring さ れ, MG で は こ の field に unnatural の alpha ヘ リ ッ ク ス が form さ れ て い が る possibility in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder6 を click を to confirm するため and Proline Line ScanningMutagenesis be 験 を っ た が, プ ロ リ ン replacement body の more く は natural structure を get で き ず, ジ ス ル フ ィ ド separation combined with straight body を す る の が difficult で あ っ た た め, Cys66 と Cys160 を Ala に replacement し た - variant を し, consummate こ れ を ベ ー ス に プ ロ リ ン replacement を guide Enter する practice を field って る る.

项目成果

Shimizu, A.et al.: "The Region of α-Lactalbumin Recognized by GroEL" Journal of Biochemistry. 124. 319-325 (1998)

Shimizu, A. 等人：“GroEL 识别的 α-乳清蛋白区域”《生物化学杂志》124. 319-325 (1998)。

Ishikawa, N.et al.: "Remarkable Destabilization of Recombinant α-Lactalbumin by an Extraneous N-Terminal Methionyl Residue" Protein Engineering. 11. 333-335 (1998)

Ishikawa, N.等人：“外源 N 末端甲硫氨酰残基对重组 α-乳清蛋白的显着不稳定”《蛋白质工程》11. 333-335 (1998)。

Ikeguchi, M.et al.: "Transition State in the Folding of α-Lactalbumin Probed by the6-120 Disulfide Bond" Protein Science. 7. 1564-1574 (1998)

Ikeguchi, M.等人：“通过 6-120 二硫键探测 α-乳白蛋白折叠的过渡状态”《蛋白质科学》7. 1564-1574 (1998)。

Fujiwara, K.et al.: "Folding-Unfolding Equilibrium and Kinetics of Equine β-Lacto-globulin:Equivalence between the Equilibrium Molten Globule State and a Burst-Phase Folding Intermediate" Biochemistry. 38(印刷中). (1999)

Fujiwara, K. 等人：“马 β-乳球蛋白的折叠-展开平衡和动力学：平衡熔球状态与突发相折叠中间体之间的等效性”生物化学 38（出版中）。