タンパク質の立体構造形成と分子内相互作用の階層性に関する研究

蛋白质3D结构形成和分子内相互作用层次研究

• 批准号: 05780445
• 负责人: 池口 雅道
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780445/
• 关键词: alpha-ラクトアルブミン; alpha-ヘリックス; フォールディング; 水素交換; ペプチド; NMR

1.大腸菌によるalpha-ラクトアルブミン(alphaLA)発現系の構築封入体として得られるalphaLArecombinantをRefoldingする条件を検討するためにジスルフィド結合還元alphaLAからの再生反応の効率を種々の条件で調べた。2.alphaLAのH^^1-NMR帰属通常の連鎖帰属法によりalphaLAのAヘリックスの一部(残基番号6〜9)とCヘリックス部分(残基番号86〜99)のNMR信号を帰属した。alphaLAのフォールディング中間体(A状態)におけるヘリックスの安定性上記の帰属されたNMR信号を用いて各アミドプロトンのA状態における水素交換反応速度を調べた。Aヘリックス部分の水素交換反応は速いため観測できなかったが、Cヘリックス部分の水素交換速度は規則構造をとっていない場合に比べて数倍から十数倍遅いものであった。合成ペプチドの構造とその安定性alphaLAの残基番号84〜100と84から107相当するペプチドを合成した。後者の101〜107の部分はA状態で疎水性クラスターを形成していることが知られており、Cヘリックスの疎水性残基(Ile95,Leu96)と相互作用することが期待された。しかしながら、両ペプチドともに水溶液中では規則構造を形成せず、A状態におけるCヘリックスの安定化には一次構造上より離れた残基との相互作用が寄与していることが示された。トリフルオロエタノールを加えると両ペプチド共にヘリックスを形成し、その変化から見積もった水溶液中でのヘリックス形成の平衡定数は10^<-3>程度であった。

1. The conditions for the construction of an enclosure for the production of Escherichia coli alpha-LLA (alpha LA) and the conditions for the production of alpha LA recombinant and Refolding were discussed. 2. The H ^^1-NMR spectra of alphaLA belong to the usual linkage method. The NMR signals of A and C of alphaLA belong to one part (residue numbers 6 ~ 9) and one part (residue numbers 86 ~ 99). The stability of alphaLA intermediate (A state) was recorded and the NMR signal was used to adjust the reaction rate of water element exchange in A state of each intermediate. A: Some of the water element exchange rate is several times higher than that of C: Some of the water element exchange rate is higher than that of C: The structure and stability of alphaLA residues 84 ~ 100 ~ 84 ~ 107 are equivalent to those of alphaLA. The latter part of 101 ~ 107 is formed in the A state, and the interaction between the water residues (Ile95,Leu96) and C is expected. In aqueous solution, regular structures are formed, A states are stabilized, and primary structures are formed. The number of equilibrium formation in aqueous solution is 10^<-3>.

项目成果

Shintaro Sugai: "Conformational Comparison between alpha-Lactalbumin and Lysozyme" Advances in Biophsics. (印刷中). (1994)

Shintaro Sugai：“α-乳清蛋白和溶菌酶的构象比较”生物物理学进展（1994 年）。

Hideo Koga: "Essential role of the Arg112 residue of cytochrome P450cam for electron transfer from reduced putidaredoxin" FEBS Letters. 331. 109-113 (1993)

Hideo Koga：“细胞色素 P450cam 的 Arg112 残基对于减少的恶臭氧还蛋白的电子转移的重要作用”FEBS Letters。

Akio Shimizu: "Unfolding of the Molten Globule State of alpha-Lactalbumin Studied by H^^1NMR" Biochemistry. 32. 13198-13203 (1993)

Akio Shimizu：“通过 H^^1NMR 研究揭示 α-乳清蛋白的熔球状态”生物化学。