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ES融合細胞を用いた体細胞核の初期化機構

ES融合细胞体细胞核重编程机制

基本信息

批准号：
17045016
负责人：
多田高
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

Nanogはホメオドメインをもつ転写因子で未分化性維持に必須の役割を果たすことが遺伝子欠損実験から明らかになっている。Nanogは転写開始点上流のOctamer/Soxエレメントに結合するOct4やSox2等の因子により未分化細胞に特異的な発現を制御されると考えられている。しかし、Nanog蛋白質の働く仕組みや機能調節機構は手つかずのまま残された問題である。我々は、ウエスタンブロット解析の結果からNanogの分子量はDNA塩基配列から予測されるものよりも大きく、翻訳後修飾を受けていることを明らかにしてきた。フォスファターゼ(脱リン酸化)処理により、Nanogの分子量が大幅に減少することから、高度にリン酸化された蛋白質であることが示された。NanogのN-末端にはセリン残基が集積しているが、それぞれをアラニン残基と置換することでリン酸化セリン残基を同定した。また、これらの恒常的低リン酸化Nanogに加え、セリン残基をグルタミン酸に置換した恒常的高リン酸化Nanogを作製し機能解析を試みた。これらの実験から、NanogのG2後期〜M期のリン酸化はCdk1リン酸化キナーゼによってもたらされることが明らかになった。しかし、Nanogタンパク質の細胞内局在、特異的DNA配列への結合能、ES細胞の分化誘導などの詳細な実験においても、正常Nanog,低リン酸化Nanogおよび高リン酸化Nanogの間で明らかな機能的違いを見いだすことができなかった。我々は、ES細胞との細胞融合によるゲノム再プログラム化により体細胞由来のNanog遺伝子が正常に機能するかを明らかにするために、Nanog遺伝子を運ぶES細胞由来の第6番染色体を融合細胞核から選択的に取り除いてみた。その結果、再プログラム化された体細胞由来のNanogは、ES細胞のNanogと同等に機能し、融合細胞の未分化性維持に必要十分な役割を果たすことを明らかにした。

Nanog is the first to write a factor that requires the maintenance of undifferentiated properties. The Octamer/Sox pathway upstream from the Nanog start point binds to factors such as Oct4 and Sox2 to inhibit the development of undifferentiated cells. Nanog proteins are regulated by functional mechanisms and are not regulated by functional mechanisms. The molecular weight of Nanog and DNA base alignment were predicted and modified by the method of molecular weight analysis. The molecular weight of Nanog was greatly reduced due to deacidification treatment. The N-terminal residues of Nanog are aggregated and replaced. This is the first time that a constant low-level acidified Nanog has been added to the system, and the second time that a constant high-level acidified Nanog has been replaced by a single residue. In the late G2 ~ M period, the acid concentration of Cdk1 was higher than that of C 2. The cellular localization of Nanog DNA, the binding energy of specific DNA sequences, the differentiation induction of ES cells, and the specific functions of normal Nanog, low-level and high-level Nanog are discussed. The fusion of ES cells and cells must be carried out in the presence of a recombinant plasmid. The fusion of ES cells and cells must be carried out in the presence of a recombinant plasmid. The fusion of ES cells and cells must be carried out in the presence of a recombinant plasmid. As a result of this, it is clear that Nanog, the origin of somatic cells, and Nanog, the equivalent function of ES cells, are essential for the maintenance of undifferentiated cells.

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Octamer and Sox elements are required for transcriptional cis regulation of Nanog gene expression

DOI：
10.1128/mcb.25.6.2475-2485.2005
发表时间：
2005-03-01
期刊：
MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
影响因子：
5.3
作者：
Kuroda, T;Tada, M;Tada, T
通讯作者：
Tada, T

Methods in Molecular Biology, Vol.348 : Nuclear Transfer Protocols

分子生物学方法，第 348 卷：核转移协议

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tada;M;Tada;T;T.Tada
通讯作者：
T.Tada

Targeted chromosome elimination from ES-somatic hybrid cell nuclei.

从 ES 体细胞杂交细胞核中定向消除染色体。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Nature Methods 4
影响因子：
0
作者：
H.Matsumura et al.
通讯作者：
H.Matsumura et al.

Toti-/Pluripotential Stem Cells and Epigenetic Modifications.

全能/多能干细胞和表观遗传修饰。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Neurodegenerative Diseases 3
影响因子：
0
作者：
H.Matsumura et al.;S.Yasuda et al.;B.C.Papova et al.;T.Tada
通讯作者：
T.Tada

Attenuated spread of X-inactivation in an X;autosome translocation

DOI：
10.1073/pnas.0602021103
发表时间：
2006-05-16
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Popova, Bilyana C.;Tada, Takashi;Nesterova, Tatyana B.
通讯作者：
Nesterova, Tatyana B.