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霊長類ES細胞による体細胞核の再プログラム化

灵长类 ES 细胞对体细胞核的重编程

基本信息

批准号：
13878183
负责人：
多田高
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

1)サルES細胞でのHprt遺伝子のノックアウト我々独自の体細胞とES細胞の細胞融合実験系を用いて、霊長類ES細胞がもつ体細胞核再プログラム化能を検討する目的で、X染色体上にあるHprt遺伝子のノックアウトを試みた。雄XYのES細胞では、Hprtの遺伝座が1つしか存在しないため、容易にHprt欠損ES細胞を作ることが可能である。Hprt欠損ES細胞とHprt正常体細胞との融合細胞では、HAT感受性であったES細胞が耐性に変化するため、融合細胞のみが生き残る。サルES細胞のHprt遺伝子ノックアウトは、候補ES細胞の選択は完了しているが最終的な特性解析が進行中であり、結果が待たれる。Hprt欠損ES細胞が得られれば、体細胞との融合実験を行う予定である。2)マウス融合細胞実験系を用いた体細胞核の多分化能昨年度は、体細胞核の再プログラム化をOct4-GFP遺伝子やX染色体の再活性化をマーカーに用いて解析した。本年度は、再プログラム化された体細胞核の多分化能を解析する目的で、亜種間融合細胞を作成し、再分化後の組織特異的遺伝子発現がES細胞核または再プログラム化体細胞核のいずれに由来するかを明らかにした。融合細胞を生体内で分化誘導した奇形種での遺伝子発現を解析したところ、ES細胞核と同様に再プログラム化体細胞核からも内・中・外胚葉由来の組織特異的遺伝子が発現していることを突き止めた。融合細胞を神経特異的な培養条件下で分化誘導すると、ES細胞と同様にドーパミン産生神経のマーカー遺伝子が再プログラム化体細胞核からも発現していた。これらの結果は、細胞融合による再プログラム化体細胞核がES細胞と同様の分化能を獲得していることを明確に示しており、拒絶反応の無い個人対応のテーラーメイドES細胞を作製する新たなアプローチとして注目される。加えて、体細胞核の再プログラム化をX染色体上のXistおよびTsix遺伝子のクロマチン構造の変化としてとらえる事に成功した。

1) We have isolated ES cells, ES cells, fusion cells, fusion cells, long-term ES cells, nuclei, nuclei, and X chromosomes. The purpose of this study is to detect the expression of Hprt genes on the X chromosome. Male XY'ES 'cell, Hprt' 'cell' 1 'may exist, so it is easy for Hprt to owe ES' cell to cause infection. Hprt lacks ES cell, Hprt normal cell, fusion cell, HAT receptivity cell, ES cell, tolerance cell, fusion cell, and mutilated cell. After ES, the most advanced feature analysis is in progress, and the results are waiting to be completed. The results are pending. Hprt is short of ES cells, and somatic cells are expected to be fused. 2) the fusion cell line was used to analyze the multi-differentiation ability of the cell nucleus in the past year, and the nucleus of the body cell was reactivated by the reactivation of the Oct4-GFP chromosome. In this year, we can analyze the purpose of cell differentiation, fusion cell formation and tissue specific cell differentiation after redifferentiation. This year, we can analyze the purpose, fusion cell formation, and tissue specific cell differentiation this year. This year, we can analyze the purpose, fusion cell formation and redifferentiation of ES cells. The fusion cell differentiation in vivo led to the identification of the oddball species, and the nuclei of the ES cells were homologous to the nuclei of the eukaryotic cells. The origin of the ectoderm in the nuclei of the cells showed that the cells of the tissue tissue had a sudden change. Under the condition of cell differentiation and differentiation under the condition of cell culture, the differentiation leader and the ES cell were cultured in the same way. The results showed that the differentiation of nuclei and ES cells of the fusion cells was able to show clearly that the cells were infected and rejected. The cells of the ES cells showed that they were not responsible for the development of the disease. The nuclei of the cells were added and the nuclei of the cells were then transformed into Xist cells, Tsix cells on the X chromosome, and the cells were successfully transformed.