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遺伝薬理学的手法による抗癌剤作用機序の解析-新規動物細胞株ライブラリを用いて-

利用药物遗传学方法分析抗癌药物的作用机制-利用新的动物细胞系库-

基本信息

批准号：
18015026
负责人：
園田英一朗
金额：
$ 5.38万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1)分子標的剤の作用機序の解析a)細胞株パネルから代表的なDNA修復欠損株、今回2重鎖切断に特異的に欠損を示す、Rad54欠損、Brca2欠損、Ku70欠損株を用いて、プロテオゾーム阻害剤の作用点を同定した。細胞をプロテオゾーム阻害剤(ボルテオゾミブおよびラクトスタチン)で処理した後、放射線により2重鎖切断を誘導し、その修復速度をリン酸化ヒストンH2AXのフォーカスで調べると、未処理群に比べ処理群ではその修復速度が優位に低下していた。2重鎖切断基質を用いて組換え能を調べると、処理群ではRad依存性の相同組換え能が特異的に低下しており、Ku依存性の非相同組換え能は正常に保たれていた。さらに処理群では放射線照射後のRad51フォーカスの形成がほとんどみられなかった。一方、処理細胞でも2重鎖切断の初期に誘導されるリン酸化ATM、リン酸化H2AX、リン酸化SMC1集積は、放射線およびレーザー照射法にて正常に保たれており、一本鎖に集積するRPA、ATRの集積が処理細胞では低下していることがわかった。これらのことから、プロテオゾーム阻害剤の作用点は従来考えられていた、NK-kappaBを介する経路以外に、相同組換えを抑制することで殺細胞作用を発揮していることが示され、放射線治療とプロテオゾーム阻害剤の併用で相乗効果が期待できることが示唆された。2)修復遺伝子SNPの機能評価今回、相同組換えに関与するXRCC2, XRCC3, RAD51のCaucasianにみられるSNPを選び、それぞれXRCC2-/-, XRCC3-/-, RAD51-/-DT40細胞に導入し、抗ガン剤シスプラチンに対する感受性を野生型のそれと比較した。今回調べた3種類の相同組換えに関する遺伝子のSNPは、薬剤感受性に関して野生型とほぼ同様な機能を示した。興味深いことに、XRCC2のSNP(188His)シスプラチンに対して野生型よりさらに耐性を示した。これら変異を持つ個人は、シスプラチンによる化学療法に耐性を示す可能性があり、より高濃度での薬剤使用が可能ではないかと考えられた。

1) Analysis of molecular target mechanism a) Cell line regeneration represented by DNA repair defective strain, current 2-fold lock cut specific defective strain, Rad 54 defective strain, Brca 2 defective strain, Ku 70 defective strain, and the same point of action of DNA repair defective strain. After treatment, the radiation was re-locked, and the repair speed of the cells was reduced. Compared with the untreated group, the repair speed of the untreated group was lower. 2. Relocking the matrix, using the same set of switch functions to adjust, processing the same set of switch functions depending on Rad, and maintaining the same set of switch functions depending on Ku. After radiation exposure, Rad 51 was formed. In the initial stage of treatment, the cells were treated with 2-fold lock-off, and the cells were treated with 2-fold lock-off. The point of action of the blocking agent is the effect of radiation therapy on the cytocidal action of the blocking agent. 2)Functional evaluation of repair gene SNPs in XRCC 2, XRCC 3, RAD51 Caucasian SNPs selected from the same group, including XRCC 2-/-, XRCC 3-/-, RAD51-/-DT40 cells introduced into, resistant to, and susceptible to wild-type comparison. The SNP and gene susceptibility of the three species are related to the same function of wild-type and wild-type. The SNP (188His) of XRCC 2 is resistant to wild type. This is the first time that a patient has been treated with chemotherapy.